Procédé de préparation de l'antibiotique de vancomycine de manière microbiologique par fermentation aérobie, consistant à utiliser une souche appartenant à l'espèce Micropolyspora dans un milieu de culture contenant des sources de carbone et d'azote assimilables ainsi que des sels minéraux. Selon l'invention on utilise en tant que micro-organismes les mutants NCAIM 00192 et NCAIM 001093 résistant aux aminoglycosides de la souche appartenant à l'espèce Micropolyspora orientalis. Les nitrates constituent des sels minéraux adaptés à la fermentation. La farine de soja, le glycérol, le gluconate de calcium, l'amidon constituent des sources de carbone utiles. La fermentation est de préférence mise en oeuvre à une température comprise entre 29 et 30 °C. L'antibiotique de vancomycine produit dans la fermentation est séparé par osmose inverse et ultrafiltration après chromatographie par échange d'ions.