| 摘要 |
La présente invention concerne un procédé de reproduction d'arbres conifères par embryogénèse somatique en utilisant des techniques de culture de tissus végétaux. La méthode consiste en un procédé de culture en plusieurs stades. Une explante appropriée, en général l'embryon fertilisé excisé d'une graine mature ou immature, est cultivée en premier lieu sur un support qui induit de multiples pro-embryons précoces. De préférence les pro-embryons du stade d'induction sont encore multipliés dans une seconde culture ayant des hormones de croissance réduite. Les pro-embryons précoces sont ensuite placés dans ou sur une culture de développement des pro-embryons tardifs ayant un potentiel osmotique considérablement plus élevé que la culture du stade ou des stades antérieurs. Ce milieu à potentiel osmotique plus élevé est la clé du développement de pro-embryons tardifs très robustes ayant au moins environ 100 cellules et de multiples cellules suspensoirs. A ce stade, la culture se poursuit dans un milieu de développement d'embryons ayant très peu ou manquant d'hormones de croissance mais contenant de l'acide abscisique. Après une période de plusieurs semaines, des embryons cotylédonaires se forment. Ces embryons cotylédonaires ont une structure bipolaire bien définie avec des primordia cotylédonaires à une extrémité et une radicule latente à l'autre. A ce point, la culture s'effectue dans l'obscurité ou avec une lumière très atténuée. Les embryons cotylédonaires sont ensuite transférés vers un milieu de croissance avec une photopériode lumière/obscurité pour le développement de plantules. Les plantules peuvent ensuite être transplantées dans de la terre pour continuer leur croissance. Le procédé a eu du succès avec une grande variété d'espèces et avec de nombreux génotypes qui, jusqu'ici, n'avaient pu se propager par embryogénèse. |
