Method for enzyme activity determination characterized by the use of substrates which fluorescent properties differ from those of the converted products.

摘要

On a mis au point un procédé démontrant la présence d'activité enzymatique à l'aide d'un substrat fluorogène (A) transformé par l'enzyme en un produit (B) différent de (A) en ce qui concerne ses propriétés fluorescentes. Is se caractérise en ce que (A) et/ou (B) portent un chromophore qui est un sensibilisateur de triplet ayant un niveau d'énergie de triplet supérieur au niveau d'excitation d'un ion de lanthanide choisi parmi Eu3+, Tb3+, Dy3+ et Sm3+, et capable de chélater ledit ion de lanthanide au moyen d'un atome d'oxygène et/ou d'azote dans ledit chromophore, facultativement avec des groupes de chélation liés audit chromophore. Ladite transformation enzymatique de (A) en (B) a pour résultat de provoquer soit la disparition soit la création de ladite capacité de chélation et/ou de faire subir un changement à la structure de chromophore. On procéde à la mesure de fluorescence en présence dudit ion de lanthanide par spectrométrie de fluorescence à résolution dans le temps.