还原型非糖基化重组人体间白细胞素—2的制备方法

摘要

本发明涉及制备还原型非糖基化重组人体IL₂的方法，该方法包括提取转化微生物体内以颗粒形式存在的IL₂，然后用反相HPLC纯化。

主权项

1、制备非糖基化重组人体IL2(Interleukine2)及其顺序的同位基因或衍生物的方法，所述人体IL2，一方面具有下述氨基酸排列顺序，即 X-Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn AsnTyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 其中X代表蛋氨酸或氢原子，位于58，105和125位的三个半胱氨酸均为还原型；另一方面具有与同一氨基酸顺序的氧化型IL2相同的生物活性，氧化型IL2在58-105位有一双硫键桥；该制备方法包括，先用离液序列高的试剂将转化微生物体内以颗粒状累积的IL2溶于还原介质中，进行提取，然后通过沉淀纯化，继之用反相高效液相色谱仪纯化，用酸性洗脱液洗脱；该制备方法的特征在于 a)必要时，将从上述色谱仪中洗脱的主要馏分冷却至-20℃再分离出水相， b)用酸性介质稀释所得水相，然后于另一反相高效液相色谱柱上层析，酸性介质洗脱，分离得到上述的IL2。