ACRIDINIUM ESTER LABELLING AND PURIFICATION OF NUCLEOTIDE PROBES

摘要

Procédés permettant la préparation, le marquage et la purification de sondes d'acide nucléique contenant des amines primaires avec du fluorosulfonate 4-(2-succinimidyloxycarbonyle-éthyle)phényle-10-méthylacridinium-9-carboxylate d'esters d'acridinium. Le procédé de fixation d'esters d'acridinium à des sondes utilise des concentrations élevées d'esters d'acridinium (de 0,1 à 50mM) obtenues à l'aide d'un solvant organique dans des concentrations de 20 % à 80 % en volume, et peut être réalisé soit en solution soit avec l'ester d'acridinium ou la sonde suspendue en solution. La purification (la séparation de la sonde marquée, de la sonde non marquée et de la marque libre) consiste (1) d'abord à retirer la plus grande partie de la marque d'ester d'acridinium libre, de la sonde, à l'aide de techniques de séparation rapide, puis à retirer sensiblement toute la marque libre restante de la sonde, et à séparer la sonde marquée de la sonde non marquée, en mettant en oeuvre les applications spécifiques de l'HPLC à échange ionique, à phase inverse ou d'hydroxyapatite.