NUCLEIC ACID PROBE ASSAY METHODS AND COMPOSITIONS.

摘要

Procédés d'analyse à l'aide de sondes d'acide nucléique, notamment procédés d'analyse en sandwich, et compositions utilisées dans ces procédés. Ces derniers utilisent de nouveaux supports solides dérivés de sondes d'oligonucléotides, dans lesquels est liée de manière terminale et covalente une sonde d'oligonucléotides de 15 à 100 bases dans une séquence complémentaire à une séquence d'analyte d'acide nucléique. Les supports solides ci-décrits sont à base de perles de verre à porosité controlée derivé d'amino, sulfhydryle ou carboxyle, de dextrane réticulé traité avec du bromure de cyanogène, ou de polystyrène. La liaison entre l'oligonucléotide à liaison terminale et le support est effectuée par l'intermédiaire de ces groupes, d'où le matériau de support est dérivé. Les procédés ci-décrits se fondent sur plusieurs découvertes inattendues faites pendant l'étude des propriétés des nouveaux supports solides susmentionnés: (A) Il y a peu de différence entre deux analyses en sandwich effectuées l'une (i) en hybridisant simultanément l'analyte sur la sonde liée au support solide et sur la sonde étiquetée en solution, et l'autre (ii) en hybridisant d'abord l'analyte et la sonde étiquetée et ensuite l'analyte sur la sonde liée au support. (B) L'efficacité de capture d'analyte est accrue par la préhybridation du support solide dérivé de la sonde avec un acide nucléique non homologue ou un sulfate de dextrane ou les deux. (C) La présence de sulfate de dextrane dans une solution d'hybridation accroît de manière significative l'efficacité de capture d'analyte par le support solide dérivé de la sonde. L'invention se rapporte également à des kits d'analyse en sandwich à l'aide de sondes d'acide nucléique comportant les supports solides ci-décrits.