CLONING AND EXPRESSION OF THE 47-KILODALTON ANTIGEN OF TREPONEMA PALLIDUM

摘要

Des anticorps monoclonaux dirigés contre l'immunogène pricipal de surface de la membrane externe de 47 kDa du Treponema pallidum virulant ont été utilisés pour sélectionner des clones recombinants de E. coli exprimant l'immunogène de 47 kDa. Le phénotype des clones s'est révélé dépendant de la présence du plasmide recombinant dans la cellule hôte. L'hybridation de type ''Southern'' a montré que la séquence ADN de T. pallidum clonée était une représentation précise de l'agencement ADN génomique de T. pallidum. IgG purifié de lapins infectés en laboratoire avec des sérums syphilitiques secondaires humains et de T. pallidum ont réagi de manière spécifique avec les clones tandis que le sérum humain normal ou IgG provenant du sérum de lapins normaux n'ont pas réagi. Les résultats de l'hybridation de type ''Southern'' ont indiqué qu'un gène immunogène de 47 kDa homologue était absent dans au moins quatre espèces de tréponèmes non pathogènes testés, ainsi qu'à partir de l'ADN génomique total de lapins. L'anti-sérum de Reiter (non pathogène tréponème) du biotype anti-T. phagedenis de lapins et un anticorps monoclonal dirigé contre un déterminant tréponème ''commun'' n'ont pas réagi avec les clones. Des expériences de radioimmunoprécipitation et de ''Western blotting'' avec des anticorps monoclonaux spécifiques ont montré que les formes recombinante (E. coli) et native (T. pallidum) de l'antigène avaient des mobilités électrophorétiques identiques. L'immunogène recombinant de 47kDa offre de nouvelles possibilités d'analyse biochimique de la protéine, d'études structure-fonction, examen de son rôle dans la pathogénèse microbienne et établissement de ses potentiels diagnostiques et vaccinogènes.