PROCEDIMIENTO DE CLONACION DE FACTOR HUMANO VIII-R.

摘要

METODO DE CLONACION DE FACTOR HUMANO VIIIR, O SUS FRAGMENTOS EN UN SISTEMA HUESPED RECOMBINANTE ANTERREPLICANTE. CONSISTE EN LA EXTRACCION DE ARN CELULAR A PARTIR DE CULTIVOS DE CELULAS ENDOTELIALES HUMANAS Y ENRIQUECER LA MEZCLA DE ARN-M ENRIQUECIDO CON UNA MEZCLA QUE CONTIENE LA TRANSCRIPTASA INVERSA DE VIRUS DE MIELOBLASTOSIS AVIAR Y UN INICIADOR OLIGO (DY)18; HIDROLIZAR EL ARN EN CONDICIONES ALCALINAS Y FORMAR UNA SEGUNDA CADENA DE ADN-C MEDIANTE INICIACION DE BUCLE DE HORQUILLA Y SINTESIS DIRIGIDA POR SUBUNIDADES GRANDES DE ADN POLIMERASA I DE E. COLI; INCORPORAR EL ADN-C-DC EN UN VECTOR; E IDENTIFICAR LOS VECTORES, EN QUE SE HA INCORPORADO EL ADN-C-DC MEDIANTE TRANSCRIPCION Y TRADUCCION IN VITRO DE SUS FRAGMENTOS Y DETECCION DE LOS PRODUCTOS DE TRADUCCION POR VIA INMUNOLOGICA.