EXPRESSION OF ENZYMATICALLY ACTIVE REVERSE TRANSCRIPTASE.

摘要

Est décrit un plasmide qui, lorsqu'il est introduit dans une cellule hôte appropriée et dans des conditions appropriées de culture, effectue l'expression d'un gène sur le plasmide, ce qui permet de produire un polypeptide possédant une activité de transcriptase inverse. Le plasmide est une molécule d'ADN à double brin comprenant dans l'ordre 5' à 3' les éléments suivants: une séquence d'ADN contenant un promoteur inductible; une séquence d'ADN comprenant un codon d'initiation d'ATG; la partie centrale du gène pol du virus de la leucémie de murine de Moloney (MuLV), cette partie centrale comprenant une séquence d'ADN qui code le polypeptide possédant une activité de transcriptase inverse; une séquence d'ADN contenant un gène associé à un trait phénotypique sélectionnable ou identifiable se manifestant lorsque le vecteur est présent dans la cellule hôte et une séquence d'ADN contenant une origine de réplication provenant d'un plasmide bactérien capable de réplication autonome dans la cellule hôte. Est également décrit un procédé de récupération de polypeptide purifié enzymatiquement actif possédant une activité de transcriptase inverse, ce polypeptide étant codé par le plasmide pB6 B15.23, à partir d'une cellule hôte appropriée, par exemple l'E. coli HB101 produisant le polypeptide. L'invention se rapporte également à l'utilisation du polypeptide pour préparer un ADN complémentaire (ADNc).