Process for activating recombinant heterologous eucaryotic disulfide-bridged proteins after expression by procaryotes.

摘要

Zur Aktivierung von gentechnologisch hergestellten, heterologen, Disulfidbrücken enthaltenden eukaryontischen Proteinen nach Expression in Prokaryonten durch Zellaufschluß, Solubilisierung unter denaturierenden und reduzierenden Bedingungen und Aktivierung unter oxidierenden Bedingungen in Gegenwart von GSH/GSSG arbeitet man entweder in der Stufe der Aktivierung bei einem pH-Wert von 9 bis 12, eine GSH-Konzentration von 0,1 bis 20 mmol/l, einer GSSG-Konzentration von 0,01 bis 3 mmol/l und mit einer nicht denaturierenden Konzentration des Denaturierungsmittels oder indem man die Reduktions-/Denaturierungsmittel abtrennt, durch Zugabe von GSSG unter denaturierenden Bedingungen die Thiolgruppen der Proteine in die gemischten Disulfide von Protein und Glutathion überführt, in der Stufe der Aktivierung bei einem pH-Wert von 7 bis 10,5 eine GSH-Konzentration von 0,5 bis 5 mmol/l und eine nicht denaturierende Konzentration des Denaturierungsmittels einstellt. Das Verfahren ist insbesondere für t-PA und Interferonβwertvoll.