| 主权项 |
1.一种监别畜肉中是否含有猪、羊及/或牛肉之核酸快速检测方法,其包含使用一引子对,于聚合链反应中专一性放大猪、羊或牛肉之粒线体DNA之12S rRNA序列之690-695bp片段,其中该引子包含M12S-266F及M12S-1007R;其中该M12S-266F及M12S-1007R包括下列序列:M12S-266F:5'-gccagccaccgcggtca-3'M12S-1007R:5'-cttaccttgttacgacttgc-3'2.一种检测混合畜肉中是否含有猪、羊及/或牛肉之核酸检测方法,其包括下列步骤:a)使用含有M12S-266F及M12S-1007R之引子对,放大该混合畜肉之总粒线体DNA之12S rRNA序列;b)检测放大产物,其中如有690-695bp片段存在表示该混合畜肉样品中含有猪及/或羊及/或牛肉。3.一种检测混合畜肉之核酸检测方法,其包括下列步骤:a)使用包含M12S-266F及M12S-1007R之引子对,放大该混合畜肉之总粒线体DNA之12sRNA序列;b)将步骤a)放大所得之690-695bp片段以AluI、DdeI或RsaI限制切割;c)将步骤b)所得之限制切割片段进行核酸电泳多型态分析;d)将步骤c)之多型态分析结果与下列片段进行比对,比对结果符合下列任一片段代表该混合畜肉所含之畜肉种类;其中如有AluI限制切割存在391-395bp之片段代表牛肉;如有AluI限制切割存在118-122bp、245-249bp及275-279bp之片段代表羊肉;AluI限制切割存在283-287bp及239-243bp之片段代表猪肉;DdeI限制切割存在91-95bp、123-127bp及349-353bp之片段代表牛肉;如有DdeI限制切割存在165-169bp及348-352bp之片段代表羊肉;如有DdeI限制切割存在95-99bp及597-601bp之片段代表猪肉;如有RsaI限制切割存在41-45bp、205-209bp及439-443bp之片段代表牛肉;如有RsaI限制切割存在248-252bp及439-445bp之片段代表羊或猪肉。4.根据申请专利范围第3项之方法,其中电泳多型态核酸分析为琼脂胶电泳、丙烯醯胺胶电泳或萤光-毛细管电泳分析。5.根据申请专利范围第3项之方法,其中限制为AluI或DdeI。6.根据申请专利范围第3项之方法,其中限制为DdeI。7.根据申请专利范围第3项之方法,其中混合畜肉中含有牛肉可由DdeI限制切割存在91-95bp、123-125bp及349-353bp之片段检测。8.根据申请专利范围第3项之方法,其中混合畜肉中含有羊肉可由DdeI限制切割存在165-169bp及348-352bp之片段检测。9.根据申请专利范围第3项之方法,其中混合畜肉中含有猪肉可由DdeI限制切割存在95-99bp及597-601bp之片段检测。10.一种用于监别畜肉中是否含有猪、羊及/或牛肉之核酸快速检测之引子对,其中该引子包含M12S-266F及M12S-1007R;其中该M12S-266F及M12S-1007R包括下列序列:M12S-266F:5'-gccagccaccgcggtca-3'M12S-1007R:5'-cttaccttgttacgacttgc-3'。图式简单说明:图1为利用本发明PCR引子对针对10种不同动物mtDNA的12S rRNA基因进行PCR增殖之琼脂胶电泳图。图2为利用本发明PCR引子对于不同畜肉进行PCR增殖后所得产物之核酸序列(A)及限制图谱(B)。图3为利用本发明PCR引子对于不同畜肉进行PCR增殖后,所得产物经不同限制切割后之琼脂胶电泳图。图4为利用本发明PCR引子对于不同畜肉进行PCR增殖后,所得产物经限制DdeI切割,并经萤光-毛细管电泳所得之多型态图。图5为利用本发明PCR引子对于混合肉样品进行PCR增殖后,所得产物经限制DdeI切割,并经萤光-毛细管电泳所得之PCR-限制片段多型态图。 |
