用嗜热放线菌生产固定化葡萄糖异构酶的方法及其用于高果糖浆的生产方法

摘要

用嗜热放线菌生产固定化葡萄糖异构酶的方法及其用于高果糖浆的生产方法是一种制酶及酶法制糖方法。该菌发酵条件粗放，较高温不易污染，酶活350单位/毫升，胞外酶占总酶90％。用离子交换树脂挂酶，酶活8,000～10,000单位/克(干)，总酶回收率65～70％，用酶法葡萄糖制得42％高果糖浆转化比为1∶3000。

主权项

1、用嗜热放线菌生产固定化葡萄糖异构酶的方法： 第一步：把嗜热放线菌放在含有淀粉、硝酸钾、硫酸镁、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸亚铁的培养基上高温培养。 第二步：把前一步得到的嗜热放线菌放在含有麸皮、豆饼、硫酸镁、磷酸氢二钾、氯化钴的培养基上通气高温培养种子。 第三步：把种子放入发酵罐内，用含有麸皮、豆饼、硫酸镁、磷酸氢二钾、氯化钴的培养基上通气高温发酵。 第四步：把前一步得到的发酵液过滤，得清发酵液。 第五步：使清发酵液中的酶固定在载体上。 其特征在于所说的嗜热放线菌是寄存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心寄存号为CGMCC№·0032的嗜热放线菌StreptomycesM1033。 甲、所说明菌其培养特征为： (1)察氏培养基：生长良好，气丝从乳白色到深灰色，基丝由白到黄褐色，不形成可溶性色素。 (2)淀粉琼脂：生长良好，气丝由白色到灰色，基丝由乳白色到浅黄色，不形成可溶性色素。 (3)马铃薯浸汁：生长良好，气丝由白色到灰褐色，基丝由金黄色到浅褐色，不形成可溶性色素。 (4)马铃薯块：生长一般，气丝由白到浅灰色。 (5)葡糖天冬素琼脂：生长良好，气丝由白色到灰色，基丝由乳白色到黄色，不形成可溶性色素。 (6)葡糖蛋白胨琼脂：生长良好，气丝白到浅灰色，基内菌丝由白色到浅褐色，不形成可溶性色素。 乙、所说明菌的形态特征为： 45°～50℃在高氏1号培养基上生长良好，培养3天，气丝由白色到灰色，培养3～5天，产生灰色胞子。菌落为园形，似伞状，表面呈粉状，胞子丝形状为：弯曲至形成螺旋，胞子形状为：园形、椭园形。 丙、所说明菌的生理生化特征为： (1)明胶培养基：生长一般，液化明胶能力较弱。 (2)牛奶培养基：生长一般，对牛奶的凝固胨化能力较差。 (3)淀粉水解琼脂：生长良好，能利用淀粉，气生菌丝从白到灰白色，无可溶性色素形成。 (4)酪氨酸琼脂：生长困难，少数菌落，气丝由白到灰褐色，不形成可溶性色素，酪氨酸酶为阴性。 (5)碳源利用：能够很好地利用淀粉、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖、鼠李糖、甘露糖、肌糖。很难利用棉子糖。 均一态葡萄糖异构酶的某些性质：清发酵液经(NH₄)₂SO₄沉淀透析脱盐，DEAE-Sephadex A₅₀柱和Sephadex G₁₅₀柱提纯，得均一态葡萄糖异构糖，园盘电泳为一个区带。 酶蛋白组成为：天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸等。比酶活为180·86单位/mg，米氏常数Km为0·56M。此酶不但能将D-葡糖和D-果糖相互可逆转化，也可将D-木糖和D-木酮糖，D-核糖和D-核酮糖相互可逆转化。