表达人类C蛋白的活性的载体和方法

摘要

本发明叙述编码人C蛋白质活性的DNA化合物。构建了各种真核的和原核的重组体DNA表达载体，其中包含编码新的C蛋白质活性的DNA，当转化到适当的宿主细胞中去后，驱使蛋白质C活性的表达。新的表达载体可用于产生蛋白质C衍生物，例如无羧化的、无糖基化的或无羟基化的蛋白质C，以及产生蛋白质C的前体，例如新生的或酶原型的蛋白质C，并可产生蛋白质C的亚碎片，例如具有活性和无活性的轻链和重链。重组体产生的蛋白质C的活性对治疗和防止各种脉管疾病是有效的。

主权项

1、一种制备重组体DNA载体的方法，该DNA编码具有人C蛋白质活性的一条多肽，其特征是连接DNA的一些片段，所有这些片段包含(A)编码股5′-R1N-RM-GCC AAC TCC TTC CTG GAG GAG CTC CGT CAC AGCAGC CTG GAG CGG GAG TGC ATA GAG GAG ATC TGT GAC TTC GAGGAG GCC AAG GAA ATT TTC CAA AAT GTG GAT GAC ACA CTG GCCTTC TGG TCC AAG CAC GTC GAC GGT GAC CAG TGC TTG GTC TTGCCC TTG GAG CAC CCG TGC GCC AGC CTG TGC TGC GGG CAC GGC ACG TGC ATC GAC GGC ATC GGC AGC TTC AGC TGC GAC TGC CGCAGC GGC TGG GAG GGC CGC TTC TGC CAG CGC GAG GTG AGC TTCCTC AAT TGC TCG CTG GAC AAC GGC GGC TGC ACG CAT TAC TGC CTA GAG GAG GTG GGC TGG CGG CGC TGT AGC TGT GCG CCT GGCTAC AAG CTG GGG GAC GAC CTC CTG CAG TGT CAC CCC GCA GTGAAG TTC CCT TGT GGG AGG CCC TGG AAG CGG ATG GAG AAG AAGCGC AGT CAC CTG AAA CGA GAC ACA GAA GAC CAA GAA GAC CAAGTA GAT CCG CGG CTC ATT GAT GGG AAG ATG ACC AGG CGG GGAGAC AGC CCC TGG CAG GTG GTC CTG CTG GAC TCA AAG AAG AAGCTG GCC TGC GGG GCA GTG CTC ATC CAC CCC TCC TGG GTG CTGACA GCG GCC CAC TGC ATG GAT GAG TCC AAG AAG CTC CTT GTCAGG CTT GGA GAG TAT GAC CTG CGG CGC TGG GAG AAG TGG GAGCTG GAC CTG GAC ATC AAG GAG GTC TTC GTC CAC CCC AAC TAC AGC AAG AGC ACC ACC GAC AAT GAC ATC GCA CTG CTG CAC CTG GCC CAG CCC GCC ACC CTC TCG CAG ACC ATA GTG CCC ATC TGCCTC CCG GAC AGC GGC CTT GCA GAG CGC GAG CTC AAT CAG GCCGGC CAG GAG ACC CTC GTG ACG GGC TGG GGC TAC CAC AGC AGCCGA GAG AAG GAG GCC AAG AGA AAC CGC ACC TTC GTC CTC AACTTC ATC AAG ATT CCC GTG GTC CCG CAC AAT GAG TGC AGC GAGGTC ATG AGC AAC ATG GTG TCT GAG AAC ATG CTG TGT GCG GGCATC CTC GGG GAC CGG CAG GAT GCC TGC GAG GGC GAC AGT GGGGGG CCC ATG GTC GCC TCC TTC CAC GGC ACC TGG TTC CTG GTGGGC CTG GTG AGC TGG GGT GAG GGC TGT GGG CTC CTT CAC AACTAC GGC GTT TAC ACC AAA GTC AGC CGC TAC CTC GAC TGG ATCCAT GGG CAC ATC AGA GAC AAG GAA GCC CCC CAG AAG AGC TGGGCA CCT TAG-3′，其中：A为脱氧腺苷酰基，G为脱氧鸟苷酰基，C为脱氧胞苷酰基，T为胸苷酰基，R为5′-GCC CAC CAG GTG CTG CGG ATC CGC AAA CGT-3′，或5′-CAC CAG GTG CTG CGG ATC CGC AAA CGT-3′，R1为5′-ATG TGG CAG CTC ACA AGC CTC CTG CTG TTC GTGGCC ACC TGG GGA ATT TCC GGC ACA CCA GCT CCTCTT GAC TCA GTG TTC TCC AGC AGC GAG CGT -3′，或5′-ATG TGG CAG CTC ACA AGC CTC CTG CTG TTC GTGGCC ACC TGG GGA ATT TCC GGC ACA CCA GCT CCTCTT GAC TCA GTG TTC TCC AGC AGC GAG CGT GCC-3M为0或1，N为0或1，规定当M为0，N亦为0时，而当R为5′-GCC CAC CAG GTG CTG CGG ATC CGC AAA CGT-3′，R1为5′-ATG TGG CAG CTC ACA AGC CTC CTG CTG TTC GTGGCC ACC TGG GGA ATT TCC GGC ACA CCA GCT CCTCTT GAC TCA GTG TTC TCC AGC AGC GAG CGT-3′，并且当R为5′-CAC CAG GTG CTG CGG ATC CGC AAA CGT-3′，R1为5′-ATG TGG CAG CTC ACA AGC CTC CTG CTG TTC GTGGCC ACC TGG GGA ATT TCC GGC ACA CCA GCT CCTCTT GAC TCA GTG TTC TCC AGC AGC GAG CGT GCC-3′；(B)一种真核的转录和翻释的活性DNA序列，或(C)一种原核的转录和翻释的活性DNA序列，以及(D)一段可使上述载体在宿主细胞中自主复制或染色体整合的DNA序列。