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<p>PROCEDIMIENTO PARA PREPARAR CLONES DE BACTERIAS OBLIGADAMENTE METILOTROFAS, PARA PRODUCIR INSULINAS.CONSISTE EN: A) AISLAR EL PLASMIDO PBE 3, A PARTIR DE UNA BACTERIA OBLIGADAMENTE METILOTROFA COMO METHYLOMONAS CLARA DE LA CEPA DSM 2397; B) PRODUCIR UN PLASMIDO HIBRIDO CON UN REPLICON PROPIO DE LA BACTERIA OBLIGADAMENTE METILOTROFA, A PARTIR DEL PBE 3 CON UN PLASMIDO DE MARCADORES DE SELECCION, COMO PBR 322; C) INCORPORAR POR TRANSFORMACION EN UN ORGANISMO HOSPEDANTE COMO ESCHERICHIA COLI, EL PLASMIDO HIBRIDO PBR 322 DONDE ES AMPLIFICADO; D) TRATARLOS CLONES PRODUCIDOS CON UN PLASMIDO CONJUGATIVO RP 4, COL V, PARA COMPLEMENTAR EL DEFICIT DE MOVILIDAD DEL PLASMIDO HIBRIDO; E) CONJUGAR LOS CLONES OBTENIDOS DE LA ETAPA (C) CON BACTERIAS OBLIGADAMENTE METILOTROFAS COMO METHYLOMONAS CLARA CEPA ATCC 31 226 EN CALIDAD DE RECEPTACULOS; Y F) TRATAR LOS CLONES DE LA ETAPA (D) MEDIANTE UN CULTIVO QUE CONTIENE METANOL COMO MANANTIAL DE CARBONO, PARA PRODUCIR INSULINA.</p> |
