鋳型切り替え反応を用いるｃＤＮＡ合成および単一細胞トランスクリプトームプロファイリングのための方法および組成物

摘要

本出願は、個々の細胞から生成されるｃＤＮＡライブラリーの収量および平均長の両方を増大するために逆転写、鋳型切り替えおよび予備増幅が改善されたｃＤＮ’Ａ合成のための方法を開示する。この新規方法は、ＴＳＯの３’末端において単一のヌクレオシド残基をロックド核酸（ＩＮＡ）と交換すること、メチル基供与体を使用すること、および／または従来使用されているよりも高いＭｇＣｂ濃度を使用することを含む。これらの相違点を組み込んだ単一細胞トランスクリプトーム解析は、全長カバレッジ、改善された感度および精度を有し、より小さいバイアスを有し、かつ費用効果的な自動化に対してより修正可能である。本発明はまた、３’末端にロックド核酸を含むｃＤＮＡ分子、これらのｃＤＮＡ分子を含む組成物およびｃＤＮＡライブラリー、ならびに単一細胞トランスクリプトームプロファイリングのための方法も提供する。