| 摘要 |
<p>Zur Herstellung einesα-Galactosidase produzierenden Mikroorganismus spaltet man sowohl eine einα-Galactosidase-Gen enthaltende DNA als auch einen für die zu verwendenden transformierbaren Zellen geeigneten Vektor, der Antibiotikaresistenzgene enthält, mit Restriktionsendonuclease Sal I vollständig gewinnt aus den Fragmenten der dasα-Galactosidase-Gen enthaltende DNA das Bruchstück mit etwa vier Megadalton relativen Molekulargewichts, mischt es mit der Lösung des ebenfalls mit Sal I gespaltenen Vektors und rekombiniert in Gegenwart von DNA-Ligase unter Bildung einer rekombinanten DNA. Die erhaltene rekombinante DNA inkubiert man mit transformierbaren Zellen unter Transformation der rekombinanten DNA in die Zellen, bebrütet die transformierten Zellen auf einem Raffinose als einzige C-Quelle enthaltenden Nährboden, isoliert und lysiert die gebildeten antibiotikaresistenten Kolonien, isoliert aus dem Lysat die Plasmid-DNA, spaltet diese mit Restriktionsendonuclease Hind III oder Eco R I, verdünnt die erhaltene Lösung und behandelt sie mit DNA-Ligase. Die erhaltenen renaturierten Plasmide werden erneut in transformierbare Zellen eingeschleust, die transformierten Zellen werden wieder auf einem Raffinose als C-Quelle sowie Antibioticum enthaltenden Nährboden bebrütet und die gebildeten, Raffinose nicht verwertenden Kolonien werden isoliert. Man erhält so einen Mikroorganismus, welcher zwar eineα-Galactosidase, die Cofaktoren nicht benötigt, aber keine Invertase bildet.</p> |
