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<p>METODO DE PREPARACION DE UN EXTRACTO ESTANDARIZADO COAGULABLE POR ENDOTOXINA. SE PARTE DE EXTRACROS DE CELULAS SANGUNEAS DE ORGANISMOS, TALES COMO EL LIMULUS POLYPHEMUS, QUE CONTIENEN DOS COMPONENTES PRINCIPALES -COAGULASA Y COAGULOGENO- A LOS QUE SE DEBE LA FORMACION DE <COAGULOS EN CONTACTO CON LA ENDOTOXINA, UTILIZANDOSE LOS EXTRACROS PARA LA REALIZACION DE ENSAYOS CON ENDOTOSXINA, SI BIEN EXITE POR LO MENOS UN COMPUESTO CUYO EFECTO INHIBIDOR SOBRE LA REACCION COAGULADORA DETERMINA VARIACIONES EN LA SENSIBILIDAD DEL ENSAYO. PARA OBTENER EL EXTRACTO ESTANDARIZADO, EL METODO UTILIZADO CONSISTE EN INACTIVAR SUSTANCIALMENTE EL INHIBIDRO, INCUBANDOSE EL EXTRACTO A UN ELEVADO PH. EL TIEMPO DE INCUBACION SUFICIENTE PARA INACTIVAR AL INHIBIDOR VARIARA SEGUN LA CANTIDAD DE ESTE Y EL GRADO DE INACTIVACION DESEADO, PUDIENDO VARIAR DE VEINTE MINUTOS A CUATRO HORAS, SIENDO PREFERIBLE UN PERIODO DE NOVENTA MINUTOS A UN PH=9 Y A 4 GRADOS CENTIGRADOS. DESPUES DE LA INCUBACION SE HACE DESCENDE R EL PH AUN NIVEL AL QUE LA COAGULASA SEA ACTIVA, POR ADICION DE UN ACIDO ACUOSO DULIUDIO AL EXTRACTO ALCALINO. EL PH OPTIMO FINAL SERA EL QUE PROPORCIONE LA SENSIBILIDAD OPTICA DEL LISATO EN UNENSAYO CON ENDOTOXINA, PREFERIBLEMENTE DE 6,0 A 7,5. EL LISATO ES LUEGO PREFERIBLEMENTE LIOFILIZADO O ALMACENADO EN ESTADO DE CONGELACION.</p> |
