一种培养雨生红球藻生产虾青素的简易方法

摘要

本发明公开了一种培养雨生红球藻生产虾青素的简易方法，该方法通过三角烧瓶、塑料桶或尼龙袋、水泥池的三步培养法，且每步通过各种理化环境参数，如氮、磷含量，pH值，培养温度，光照强度，光照时间，添加矿盐或卤盐、H₂O₂和FeCl₂及细胞状态等精确调节和控制措施，每一步目标明确，操控合理，使雨生红球藻的营养生长较好，营养生长向非营养生长转化较快，累积虾青素较多，从而提高了培养、转化、累积的效率与稳定性，也有效防止了培养过程中杂藻的污染；由于是开放式的培养，这样一是不需要密闭式光生物反应器，使生产成本大大降低，并且产能明显提高，可以进行较大规模开放培养雨生红球藻生产虾青素。

主权项

1、一种培养雨生红球藻生产虾青素的简易方法，其特征在于包括下述步骤：a将滤去杂质的淡水煮沸后冷却，添加含氮和磷的营养盐配制成培养液备用，所述培养液中氮的含量为2～10mg/L，磷的含量为0.1～0.4mg/L；b在三角烧瓶内装入所述培养液，按雨生红球藻的细胞密度为1000～6000个/毫升，将雨生红球藻接种至三角烧瓶内的培养液中，在培养温度为15℃～25℃，三角烧瓶表面光照强度为1500Lux～3000Lux，每天光照时数为10小时～18小时条件下，静置或摇瓶培养，培养至雨生红球藻细胞密度为5万～10万个/毫升，得到一级营养生长物；c将步骤b的一级营养生长物移入至白色的塑料桶或尼龙袋中，加入所述培养液，使雨生红球藻的细胞密度为1000～6000个/毫升，在培养温度为20℃～25℃，一级营养生长物表面光照强度为3000Lux～5000Lux，每天光照时数为不少于12小时条件下，第一次充气培养，培养至雨生红球藻细胞密度为10万～25万个/毫升，得到二级营养生长物；d将步骤c的二级营养生长物移入清洁水泥池中，加入所述培养液，使雨生红球藻的细胞密度为500～3000个/毫升，池内液体深度控制在0.3m～1.0m，池内液体pH值控制在8.6～10.2，培养温度为20℃～25℃，二级营养生长物表面光照强度为不高于5000Lux的自然光照条件下，第二次充气培养，培养7～12天，培养至雨生红球藻细胞密度达到6万～12万个/毫升，得到三级营养生长物；e在步骤d的三级营养生长物中加入矿盐或卤盐，使三级营养生长物中矿盐或卤盐的重量百分比浓度为0.1％～1.0％，并添加含磷的营养盐，使三级营养生长物中氮与磷的重量比为5，将池内液体深度控制在0.2m～0.8m，池内液体pH值为7.0～9.5，培养温度为20℃～28℃，三级营养生长物表面光照强度为不低于5000Lux的条件下，流水转化培养3～5天，培养至所有雨生红球藻细胞沉至池底，得到孢子态转化物；f在步骤e的孢子态转化物中加入H2O2，使孢子态转化物中H2O2的重量百分比浓度为0.001％～0.05％，一天后再加入FeCl2和含磷的营养盐，使孢子态转化物中FeCl2的重量百分比浓度为0.005％～0.05％，氮与磷的重量比为不大于0.25，池内液体深度控制在0.1m～0.5m，培养温度为22℃～30℃，孢子态转化物表面光照强度为不低于5000Lux的条件下，流水累积培养7～15天，培养至所有雨生红球藻细胞呈深红色，得到累积丰富虾青素的雨生红球藻静细胞。