| 主权项 |
1.一种集落一刺激醣蛋白,其对哺乳动物之单核细胞一巨噬细胞在集落形成上具刺激作用;该醣蛋白在结构上系以二个相同的醣基多呔当次单元体,形成一个同二聚体,并利用硫酸十二酯钠一聚丙烯醯胺凝电泳法得知此醣蛋白分子量为70 , 000 -90, 000 道尔吞;次单元体利用同一方法得知其分子量为35,000-45,000 道尔吞;此次单元体之胺基酸次序以下式表示之:Clu-Glu-Val-Ser-Glu-Tyr-Cys-Ser-His-Met-Ile-Gly-Ser-Gly-His-Leu-Gln-Ser-Leu-Gln-Arg-Leu-Ile-Asp-Ser-Gln-Met-Glu-Thr-Ser-Cys-Gln-Ile-Thr-Phe-Glu-Phe-Val-Asp-Gln-Glu-Gln-Leu-Lys-Asp-Pro-Val-Cys-Tyr-Leu-Lys-Lys-Ala-Phe-Leu-Leu-Val-Gln-Asp-Ile-Met-Glu-Asp-Thr-Met-Arg-Phe-Arg-Asp-Asn-Thr-Pro-Asn-Ala-Ile-Ala-Ile-Val-Gln-Leu-Gln-Glu-Leu-Ser-Leu-Arg-Leu-Lys-Ser-Cys-Phe-Thr-Lys-Asp-Tyr-Glu-Glu-His-Asp-Lys-Ala-Cys-Val-Arg-Thr-Phe-Tyr-Glu-Thr-Pro-Leu-Gln-Leu-Leu-Glu-Lys-Val-Lys-Asn-Val-Qhe-Asn-Glu-Thr-Lys-Asn-Leu-leu-Asp-Lys-Asp-Trp-Asn-Ile-Phe-Ser-Lys-Asn-Cys-Asn-Asn-Ser-Phe-Ala-Glu-Cys-Ser-Ser-Gln-Asp-Val-Val-Thr-Lys-Pro-Asp-Cys-Asn-Cys-Leu-Tyr-Pro-Lys-Ala-Ile-Pro-Ser-Ser-Asp-Pro-Ala-Ser-Val-Ser-Pro-His-Gln-Pro-Leu-Ala-Pro-Ser-Met-Ala-Pro-Val-Ala-Gly-Leu-,Glu-Glu-Val-Ser-Glu-Tyr-Cys-Ser-His-Met-Ile-Gly-Ser-Gly-His-Leu-Gln-Ser-Leu-Gln-Arg-Leu-Ile-Asp-Ser-Gln-Met-Glu-Thr-Ser-Cys-Gln-Ile-Thr-Phe-Glu-Phe-Val-Asp-Gln-Glu-Gln-Leu-Lys-Asp-Pro-Val-Cys-Tyr-Leu-Lys-Lys-Ala-Phe-Leu-Leu-Val-Gln-Asp-Ile-Tyr-Leu-Lys-Lys-Ala-Phe-Leu-Leu-Val-Gln-Asp-Ile-Met-Glu-Asp-Thr-Met-Arg-Phe-Arg-Asp-Asn-Thr-Pro-Asn-Ala-Ile-Ala-Ile-Val-Gln-Leu-Gln-Glu-Leu-Ser-Leu-Arg-Leu-Lys-Ser-Cys-Phe-Thr-Lys-Asp-Tyr-Glu-Glu-His-Asp-Lys-Ala-Cys-Val-Arg-Thr-Phe-Tyr-Glu-Thr-Pro-Leu-Gln-Leu-Leu-Glu-Lys-Val-Lys-Asn-Val-Phe-Asn-Glu-Thr-Lys-Asn-Leu-Leu-Asp-Lys-Asp-Trp-Asn-Ile-Phe-Ser-Lys-Asn-Cys-Asn-Asn-Ser-Phe-Ala-Glu-Cys-Ser-Ser-Gln-Asp-Val-Val-Thr-Lys-Pro-Asp-Cys-Asn-Cys-Leu-Tyr-Pro-Lys-Ala-Ile-Pro-Ser-Ser-Asp-Pro-Ala-Ser-Val-Ser-Pro-His-Gln-Pro-Leu-Ala-Pro-Ser-Met-Ala-Pro-Val-Vla-Gly-Leu-Thr-Trp-Glu-Asp-Ser-Glu-Gly-Thr-Glu-Gly-Ser-Ser-Leu-Leu-Pro-Gly-Glu-Gln-Pro-Leu-His-Thr-Val-Asp-Pro-,orGlu-Glu-Val-Ser-Glu-Tyr-Cys-Ser-His-Met-Ile-Gly-Ser-Gly-His-Leu-Gln-Ser-Leu-Gln-Arg-Leu-Ile-Asp-Ser-Gln-Met-Glu-Thr-Ser-Cys-Gln-Ile-Thr-Phe-Glu-Phe-Val-Asp-Gln-Glu-Gln-Leu-Lys-Asp-Gln-Glu-Gln-Leu-Lys-Asp-Pro-Val-Cys-Tyr-Leu-Lys-Lys-Ala-Phe-Leu-Leu-Val-Gln-Asp-Ile-Met-Glu-Asp-Thr-Met-Arg-Phe-Arg-Asp-Asn-Thr-Pro-Asn-Ala-Ile-Ala-Ile-Val-Gln-Leu-Gln-Glu-Leu-Ser-Leu-Arg-Leu-Lys-Ser-Cys-Phe-Thr-Lys-Asp-Tyr-Glu-Glu-His-Asp-Lys-Ala-Cys-Val-Arg-Thr-Phe-Tyr-Glu-Thr-Pro-Leu-Gln-Leu-Leu-Glu-Lys-Val-Lys-Asn-Val-Phe-Asn-Glu-Thr-Lys-Asn-Leu-Leu-Asp-Lys-Asp-Trp-Asn-Ile-Phe-Ser-Lys-Asn-Cys-Asn-Asn-Ser-Phe-Ala-Glu-Cys-Ser-Ser-Gln-Asp-Val-Val-Thr-Lys-Pro-Asp-Cys-Asn-Cys-Leu-Tyr-Pro-Lys-Ala-Ile-Pro-Ser-Ser-Asp-Pro-Ala-Ser-Val-Ser-Pre-His-Gln-Pro-Leu-Ala-Pro-Ser-Met-Ala-Pro-Val-Ala-Gly-Leu-Thr-Trp-Glu-Asp-Ser-Glu-Gly-Thr-Glu-Gly-Ser-Ser-Leu-Leu-Pro-Gly-Glu-Gln-Pro-Leu-His-Thr-Val-Asp-Pro-Gly-Ser-Ala-Lys-Gln-Arg-Pro-Pro-Arg-Ser-Thr-Cys-Gln-Ser-Phe-Glu-Pro-Pro-Glu-Thr-Pro-Val-Val-Lys-2.如申请专利范围第 1 项所请的集落一刺激醣蛋白,其中胺基酸第 122 位及 140 位上的天冬醯胺具有典型的 N-糖甘键结位置,而分别以天冬醯胺 (A s n ) -X-丝氨酸 (T h r ) / 苏氨酸 (S e r ) 表示之,此处的X表示任一胺基酸。3.如申请专利范围第1 项所请的集落一刺激醣蛋白,其等电点 (p I) 依据聚丙烯醯胺凝胶等电焦聚法及蔗糖一梯度等电焦聚法测知为 3.1 - 3.7。4.如申请专利范围第 1 项所请的集落一刺激醣蛋白,其中所含有的碳水化合物有:甘露糖,半乳糖、N-乙醯葡萄胺、N -乙醯半乳糖胺及N-乙醯神经氨酸。5.如申请专利范围第1 项所请的集落一刺激醣蛋白,其有一圆二色性光谱,其中在波长 208 毫微米及 222 毫微米处有最低的峰,由此顾示呈- 螺旋结构。6.如申请专利范围第1项所请的集落一刺激醣蛋白,其于60 0.5℃下加热处理60分钟,并不会失去生物活。7.如申请专利范围第 1 项所请的集落一刺激醣蛋白,其红外线光谱示于有附的图 3 中。8.如申请专利范围第 1 项所请的集落一刺激醣蛋白,其中胺基酸次序第 122 位及第140 位上的天冬醯胺具有典型的 N-糖甘键结位置,而分别以天冬醯胺 (A s n)-X-苏氨酸(T h r)/ 丝氨酸 (S er) 表示之,此处的X表示任一胺基酸;其中碳水化合物有甘露糖、半乳糖、N-乙醯葡萄胺、N-乙醯半乳糖胺及N-乙醯神经氨酸;利用聚丙烯醯胺凝胶等电焦聚法及蔗糖 - 梯度等电焦聚法测得其等电点 (p I) 为 3.1-3.7 ;圆二色性光谱于波长208 n m 及 222 n m处有最低的峰,显示其呈-螺旋结构;红外线光谱则示于有附的图3; 并于60。 0.5℃下加热处理60分钟,由于热稳定性并不致使其常去活性。9.制备如申请专利范围第 1 项所请的集落一刺激醣蛋白的方法,此方法包括:自正常人类尿液中收集分子量在70,000道尔吞以上之蛋白质:利用己先用1-4M含盐缓溶液一平衡之疏性亲和力物质,做吸附处理,再用0.5M-1.0M含盐缓衡溶液洗脱处理;接受高性能液相凝胶层析回收含分子量70,000-150,000道尔吞的部分;进一步再接受逆相高性能液相层析,于pH1-2下,利用含有0.1%三氟乙酸的溶剂做直线梯度浓度法以回收此集落一刺激醣蛋白;以上纯化步骤,除非其中另有陈述,均于;pH6.5-7.5下操作。10.如申请专利范围第 1 项所请的制备方法,其中收集具有分子量为70,000道尔吞以上的部分系依如下方式进行:于澄清化后利用超滤法将尿液去盐化并浓缩之;此尿液再与一阴离子交换树脂接触,并用0.2-0.4M之缓冲溶液洗脱;令洗脱物于-1-4M缓冲溶液内受凝胶过滤作用,这些步骤均于pH6.5-7.5下操作。11.制备如申请专利范围第 1 项所请的集落一刺激醣蛋白的方法,此方法包括:自利用集落激醣蛋白免疫之哺乳动物血清中,分离并纯化可拮抗此集落一刺激醣蛋白,并对哺乳动物单核细胞一巨噬细胞集落形成具刺激作用的特异性抗体;结合此特异性抗体于一不溶性支持物上而制备成一抗体结合支持物;将含有此集落一刺激醣蛋白的溶液与此抗体结合支持物接触以吸附溶液中之集落一刺激醣蛋白,并自抗体结合持物上洗脱出来。12.如申请专利范围第11.项所请的制备方法,其中含有集落一刺激醣蛋白的溶液系自以下群体中选用:人类尿液,可产生集落一刺激醣蛋白细胞之培养溶液,或集落一刺激因子基团重组细胞及其浓缩溶液。13.如申请专利范围第11.项所请的制备方法,其中所指的哺乳类动物包括有:兔子,山羊,羊及马。14.如申请专利范围第11.项所请的制备方法,其中不溶性支持物有:经溴化氰活化,环氧化或醯化的多醣凝胶,或一经氨乙基化或醯胼化的聚合物。15.如申请专利范围第11.项所请的制备方法,其中接触完成后,此集落一刺激醣蛋白5百万-20百万单位乃与1克(净重)的抗体结合支持物作用,洗脱则可用pH2-3之醏酸盐缓冲溶液,3-4M的硫代氰酸盐或0.1-0.2M的2,4-二硝基苯酚来进行。16.一对白血球减少症具治疗成效的成物,它包含如申请专利范围第1.项所请的醣蛋白及一种生理上可接受之稀释剂。17.如申请专利范围第16.项所请的组成物,其中如申请专利范围第1.项所请的醣蛋白已接受病毒去活性加热处理。 |
