一种半滑舌鳎卵巢细胞系的构建与应用方法

摘要

本发明的目的是提供半滑舌鳎卵巢组织细胞系的构建，包括如下的步骤：1）在无菌条件下去除半滑舌鳎卵巢组织最外层膜，在培养液中将组织剪成小块，将组织块用PBS溶液冲洗，再用胰蛋白酶溶液消化，胰酶消化后的溶液中含有细胞，细胞团和没有消化完全的组织块；2）将溶液离心去掉上清胰酶，用培养液悬浮细胞、细胞团和小组织块沉淀；制成悬液后，接种到用Ⅰ型胶原处理好的培养板中，添加培养液后置于24℃生化培养箱中培养，经过传代培养完成卵巢细胞系的构建。本发明的构建方法是利用半滑舌鳎卵巢组织成功建立了半滑舌鳎卵巢组织细胞系，建立的细胞系可以连续传代，经过这种方法所获得的传代细胞可传60代以上，能提供大量的卵巢细胞。

主权项

一种半滑舌鳎卵巢组织细胞系的构建方法，包括如下的步骤：1)在无菌条件下去除半滑舌鳎卵巢组织的最外层膜，在培养液中将组织剪成小块，将组织块用PBS溶液冲洗，再用浓度为0.25％～0.5％胰蛋白酶溶液消化，胰蛋白酶消化后的溶液中含有细胞、细胞团和没有消化完全的组织块；2)将溶液离心去掉上清胰蛋白酶，用DMEM/F12专用培养液悬浮细胞、细胞团和小组织块沉淀；制成悬液后，接种到用0.1％Ⅰ型胶原处理好的培养板中，添加培养液后置于24℃生化培养箱中培养，经过传代培养完成卵巢细胞系的构建；所述的培养液，是添加有20％胎牛血清(FBS)、100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素、40～60ng/ml的人重组表皮细胞生长因子、10～20ng/ml的人重组碱性成纤维细胞生长因子、10～20ng/ml的类胰岛素样细胞生长因子Ⅰ(IGF‑1)和10～20IU/ml人绒毛膜促性腺激素(HCG)的DMEM/F12培养液。