PROCEDIMIENTO DE OBTENCION Y PURIFICACION DEL FRAGMENTO CARBOXILO-TERMINAL DE LA DNA POLIMERASA I DE STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE

摘要

EL PROCEDIMIENTO DE OBTENCION Y PURIFICACION DEL FRAGMENTO CARBOXILO-TERMINAL DE LA DNA POLIMERASA I DE STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE ES UN METODO PARA SUBCLONAR UN FRAGMENTO DEL GEN POLA DE S.PNEUMONIAE EN UN VECTOR DE EXPRESION DE E. COLI. MEDIANTE ESTE PROCEDIMIENTO SE HA OBTENIDO EL PLASMIDO RECOMBINANTE PSM10. DICHO PLASMIDO CODIFICA PARA UN POLIPEPTIDO DE 70,6 KDA QUE POSEE LA ACTIVIDAD POLIMERASICA LIBRE DE ACTIVIDAD EXONUCLEASICA DEL ENZIMA DNA POLIMERASA-EXONUCLEASA DE S.PNEUMONIAE. EL POLIPEPTIDO HA SIDO HIPEREXPRESADO Y PURIFICADO A PARTIR DE E. COLI. EL RENDIMIENTO DE ENZIMA ACTIVA OBTENIDA CORRESPONDE APROXIMADAMENTE AL 7% DEL CONTENIDO PROTICO CELULAR. SE HAN OBTENIDO 0,73 MG DE PROTEINA PURA A PARTIR DE 500 ML DE CULTIVO, CON UNA ACTIVIDAD ENZIMATICA ESPECIFICA DE 13537 UNIDADES DE DNA POLIMERASA POR MG DE PROTEINA.