利用SNP标记鉴别蜂群抗白垩病性状的方法

摘要

本发明涉及一种利用SNP标记鉴别蜂群抗白垩病性状的方法，包括从要考察意大利蜂群中收集幼虫样本、幼虫DNA提取、合成目的引物、以提取的每个个体DNA为模版进行PCR、将PCR产物进行电泳检测后再测序、最后将获得的测序结果比对分析，根据从该蜂群中随机收集的幼虫个体在该SNP标记C2587245T出现C等位基因的频率P_C和T等位基因的频率P_T之间是否存在差异鉴别蜂群抗白垩病性状。本发明从分子生物学水平，针对意大利蜜蜂蜂群受白垩病影响严重的问题，提供了使用意大利蜜蜂幼虫抗白垩病相关的SNP（C2587245T）标记能够科学、准确、快速地鉴别意大利蜜蜂蜂群抗白垩病性能强弱，可以大大缩短意大利蜜蜂抗白垩病育种的选育周期，加快蜜蜂育种速度，降低白垩病发生对养蜂业造成的损失。

主权项

一种利用SNP标记鉴别蜂群抗白垩病性状的方法，其特征在于鉴别步骤如下：（1）蜜蜂幼虫取样：从考察的意大利蜜蜂蜂群中，随机收集3日龄的蜜蜂幼虫，每群20只蜜蜂幼虫代表整个蜂群，每个个体放在一个1.5 ml 离心管里，于‑20℃冷冻备用；（2）幼虫样本DNA的提取：分别将步骤（1）的冷冻幼虫进行组织破碎，提取幼虫DNA，并进行浓度和纯度测定；（3）鉴定引物序列如下：Primer‑F：5’‑GTCAAGGTATCACAAGCGTCA‑3’Primer‑R：5’‑ATAGTTCGCCCACGACCA‑3’扩增产物目的片段大小为465bp；（4）PCR检测： 以步骤（2）幼虫DNA为模版，以Primer‑F和Primer‑R为引物进行PCR；反应的体系为：总体积25ul，内含反应混合物Mix 12.5ul，Primer‑F 0.6ul，Primer‑R 0.6ul，DNA模版 1ul，ddH₂O 10.3ul；反应的条件为： 94 ℃预变性4min；94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸1 min，共35个循环；72℃延伸8 min；对PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，将出现目的条带的PCR反应液进行测序；（5）鉴别蜂群抗白垩病性状：将步骤（4）的测序结果用Sequencher软件进行序列比对分析，根据蜂群的C等位基因频率P_C值，鉴别蜂群抗白垩病性状。