核酸蛋白双探针SPR生物传感DNA甲基化检测方法

摘要

本发明涉及一种核酸蛋白双探针SPR生物传感DNA甲基化检测方法。本发明以SPR芯片表面包被的核酸探针特异性识别待测样本中靶基因启动子区核酸序列，继而以MBD识别其中含有甲基化的部分，芯片表面形成核酸探针－甲基化靶核酸－MBD蛋白复合物，通过SPR角的变化，实现DNA甲基化的定量检测。本发明解决了现有的甲基化检测方法普遍存在着的检测稳定性差和准确性差的缺陷。本发明开创性的将特异性核酸探针杂交和甲基化CpG结合蛋白的甲基化CpG结合功能域(MBD)特异结合甲基化DNA的特性，借助SPR检测技术平台，建立了核酸蛋白双探针SPR生物传感DNA甲基化检测方法。具有分析速度快、灵敏度高，能检测微量靶DNA甲基化，可同时进行多基因甲基化的联合检测。

主权项

1.核酸蛋白双探针SPR生物传感DNA甲基化检测方法，其特征在于以SPR芯片表面包被的核酸探针特异性识别待测样本中靶基因启动子区核酸序列，继而以MBD识别其中含有甲基化的部分，芯片表面形成核酸探针-甲基化靶核酸-MBD蛋白复合物，通过SPR角的变化，实现DNA甲基化的定量检测；具体步骤如下，(1)制备甲基化阳性标准品；(2)采用磁珠法微量核酸提取技术，提取待测体液或组织细胞样本DNA和甲基化阳性标准品DNA；(3)制备带生物素标记的核酸探针，并包被于覆盖有亲和素的芯片表面；(4)按从低浓度到高浓度的顺序，依次将甲基化阳性的标准品进样，继而通入经修饰的MBD，根据SPR曲线的变化，分别计算不同浓度的甲基化标准品所对应的SPR角的差值，获得标准曲线；(5)对芯片进行再生，进待测样本DNA，继而通入MBD；根据SPR角的变化，依标准曲线计算待测样本中甲基化靶基因的含量。