重组胎盘生长因子的制备方法

摘要

提取和纯化在诱导型原核表达系统中表达的重组胎盘生长因子(PLGF)的方法包括下列步骤：I)细菌细胞的发酵，II)内含体的提取和纯化，III)表达蛋白的复性，IV)离子交换层析，V)反相层析。

主权项

1.一种通过在修饰的原核细胞中的诱导型表达系统中表达而提取和纯化二聚体和多聚体活性形式存在的并且含有不超过1.5％单体形式的重组胎盘生长因子的方法，包括下列步骤：I)该原核细胞的发酵，II)内含体的提取和纯化，III)所表达蛋白的复性，IV)离子交换层析，V)反相层析，其特征在于实施步骤(I)直到培养基在600nm的光密度达到14至50，随后诱导；步骤(II)包括裂解培养细胞，使DNA断裂和分离内含体；在步骤(III)中，内含体溶于变性缓冲液中并使表达蛋白至少部分恢复为二聚体形式；在步骤(IV)中，二聚体和多聚体形式的表达蛋白通过阴离子交换层析与单体形式分开；在步骤(V)中，二聚体和多聚体形式的表达蛋白通过反相层析进一步与单体形式分开并最终分离，其中所述反相层析之后还有两个有机溶剂梯度逐渐增加的洗脱阶段，并且这两个洗脱阶段之间为等度洗脱条件下的洗脱阶段。