一种神经干细胞制剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种神经干细胞制剂及其制备方法，是采用人胚胎脑组织用消化液消化后加入培养基中止消化，离心后机械吹打为单细胞悬液，加入培养基，在CO₂、37℃下经过体外培养，筛选出神经干细胞球，即得到神经干细胞。中分离培养的神经干细胞，在体外传3-6代，并在传代过程中纯化神经干细胞，得到的神经干细胞制剂。所述神经干细胞制剂植入动物体内，不用免疫抑制剂或在少量免疫抑制剂的辅助治疗下，神经干细胞可以在自体生理微环境下分化形成一种类似于schwann细胞样的细胞，使髓鞘再生，脊髓功能获得重建，可以用于治疗人类脊髓疾病，特别是运动神经元病。

主权项

1、一种神经干细胞制剂的制备方法，其特征在于人死亡胚胎脑组织用消化液消化后加入培养基中止消化，离心后加入培养基机械吹打为单细胞悬液，在CO2、37℃下经过体外培养，筛选出神经干细胞球，得到神经干细胞，在体外传3-6代，并在传代过程中纯化神经干细胞，得到神经干细胞制剂；所述的消化液为0.25％胰蛋白酶或0.25％胰蛋白酶和0.01％EDTA；所述的中止消化的培养基为DMEM/F12和10-20V％胎牛血清；所述的体外培养的培养基为下述组合物：(1)N2添加剂， 0-1ml N2/100ml培养基或B27添加剂， 0-1ml B27/100ml培养基DMEM/F12 8-20mg/ml(2)碱性成纤维细胞生长因子bFGF 10-20ng/ml(3)表皮生长因子EGF 10-20ng/ml(4)转铁蛋白transferring 0.05-0.5mg/ml(5)硒酸钠 2-10ng/ml(6)腐胺 5-10μg/ml(7)胰岛素 0.01-0.05mg/ml(8)L-谷氨酸胺 0.1-0.5mg/ml(9)孕酮 5.0-10ng/ml(10)抗生素：庆大霉素 800-1300U/ml。