一种重组双顺反子表达质粒及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子的双顺反子高效表达质粒及其制备方法和用途。本发明设计了一个带起始和终止密码子的寡核苷酸片段，并将它连接到带起始和终止密码子的编码ＧＭ－ＣＳＦ成熟肽ｃＤＮＡ的５′端，构建了人ＧＭ－ＣＳＦ双顺反子高效表达质粒ＰＢＶＧＭ２，使ＧＭ－ＣＳＦ在大肠杆菌中的表达量从原来的５％提高到３０％，从而为ＧＭ－ＣＳＦ实现工业化生产提供了有利条件。

主权项

1、一种重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子双顺反子表达质粒，其特征是其双顺反子的化学结构(核苷酸序列)如下： 5′ ATG AAA CTC GAG TAG GAG GAT TAA GAA TTC ATG GCACCA GCT CGT TCT CCA AGC CCC AGC ACG CAG CCC TGG GAGCAT GTG AAT GCC ATC CAG GAG GCC CGG CGT CTC CTG AACCTG AGT AGA GAC ACT GCT GCT GAG ATG AAT GAA ACA GTAGAA GTC ATC TCA GAA ATG TTT GAC CTC CAG GAG CCG ACCTGC CTA CAG ACC CGC CTG GAG CTG TAC AAG CAG GGC CTGCGG GGC AGC CTC ACC AAG CTC AAG GGC CCC TTG ACC ATGATG GCC AGC CAC TAC AAG CAG CAC TGC CCT CCA ACC CCGGAA ACT TCC TGT GCA ACC CAG ACT ATC ACC TTT GAA AGTTTC AAA GAG AAC CTG AAG GAC TTT CTG CTT GTC ATC CCCTTT GAC TGC TGG GAG CCA GTC CAG GAG TGA 3′。