借助于膜色谱进行的维生素K依赖性蛋白的纯化

摘要

公开了一种制备含有既含有经病毒灭活的维生素K依赖性血浆组分又含有蛋白C和蛋白S、因子Ⅱ、因子Ⅶ、因子Ⅸ和/或因子Ⅹ以及其组合物的药剂例如PPSB制剂的方法，其中用合适的分离方法，特别是用膜色谱法处理含有这些组分的原料源。

主权项

1.一种制备既含有经病毒灭活的维生素K依赖性血浆组分又含有蛋白C和蛋白S、因子II、因子VII、因子IX和/或因子X以及其组合物的药剂例如PPSB制剂的方法，其中对含有这些组分的原料源按以下方法步骤进行处理：a)在相对低的离子强度下，对阴离子交换剂材料上的含有待分离组分的原料源进行固相抽提，该阴离子交换剂处于疏松块状物中、膜上、紧密片状物上，除去形成的洗脱物，如果需要，对洗脱物进行进一步的处理以回收其它物质；b)洗脱吸附在固相上的物质；c)任选地调节包含洗脱物级分的离子强度和/或pH值至随后的纯化步骤所需的条件下：d)阴离子交换剂膜色谱、亲和膜色谱、以及疏水作用色谱，其中亲和膜色谱采用固定化的，高或低分子量的物质进行，所述物质对维生素K依赖性血浆组分以及蛋白C和蛋白S具有高亲和力；e)经改变离子强度、极性和/或pH值的逐步洗脱进行单个组分的分级分离；f)任选地进行膜亲和色谱；g)任选地收集含有还未被除去的产物的洗脱物，任选地经重复步骤f)进行所述洗脱物的进一步分级分离，其中使用合适的亲和材料；h)在消除亲和键合的条件下洗脱结合到亲和材料上的物质，接着浓缩洗脱物，任选地减低用于从亲和材料洗脱的试剂的量；并且在每一色谱纯化步骤前借助离子和/或非离子去垢剂灭活病毒和/或经加热处理和/或过滤灭活病毒，以便在合适的阶段除去病毒。