人瘦素蛋白在鸡蛋蛋清中的特异表达

摘要

本发明涉及一种人瘦素蛋白(leptin)在鸡蛋蛋清中特异表达，属于动物生物反应器或基因工程技术领域。本发明构建了可在鸡蛋蛋清中特异表达人瘦素蛋白的表达载体pXABOBSV40；利用脂质体-精子载体通过人工授精获得带有外源人瘦素蛋白基因的转基因鸡。检测结果显示，外源基因导入的阳性率达60％以上；24％的后代转基因阳性鸡所产鸡蛋蛋清中表达了重组人瘦素蛋白，该重组人瘦素蛋白具有与天然人瘦素蛋白有相同的立体结构，表达水平达到每升蛋清30毫克。

主权项

1.一种在鸡蛋蛋清中特异表达外源基因人瘦素蛋白的方法，其特征在于构建一种可在鸡蛋蛋清特异表达人瘦素蛋白的表达载体pXABOBSV40，并通过脂质体-精子双载体法获得转基因鸡，该转基因鸡所产鸡蛋的蛋清中可表达重组人瘦素蛋白，所表达的重组人瘦素蛋白具有天然的立体结构，表达水平达到30毫克/升蛋清；其中，所述载体pXABOBSV40的构建步骤如下：以pSK为出发质粒，基本构成元件包括记号为X元件的长为300-500bp的Mar、卵清蛋白基因的长为1.45kb启动子A片段、卵清蛋白基因的第一个长为1.55kb的内含子B片段、长为504bp的ob基因和SV40的大T抗原的转录终止子或卵清蛋白C片段作为转录终止子，以上各元件分别通过PCR反应获得，并引入克隆用双酶切位点，X元件5’端和3’端的酶切位点为分别是Sac I和Not I；A片段5’和3’端的酶切位点分别为Not I和HindIII；B片段5’和3’两端的酶切位点分别为HindIII和Nco I；ob基因通过反转录获得cDNA，PCR获得双链cDNA，其5’和3’两端的酶切位点为Noc I和Xho I；SV40的polyA或卵清蛋白C片段转录终止子的5’和3’两端的酶切位点分别是Xho I和Kpn I；利用质粒pSK上的多克隆酶切位点一步一步把以上元件克隆串联起来组成鸡输卵管组织特异表达载体pXABOBSV40。