玉米胚乳蛋白体的分离方法

摘要

本发明涉及一种玉米胚乳蛋白体的分离方法。步骤如下：将授粉20‑25天的新鲜玉米籽粒液氮研磨至粉末，重悬于溶液A(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl,5 mM MgCl₂,7.2% sucrose,add 1 mM DTT,1mM PMSF and 罗氏混合蛋白酶抑制剂)，300 g离心30分钟去除细胞碎片，上清经2轮粗级不连续蔗糖密度梯度(1.0 M/L→1.5 M/L→2.0 M/L)离心，取1.5 M→2.0 M蔗糖界面的组分2倍溶液B(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl)稀释后，经2轮细级不连续蔗糖密度梯度(40% w/w → 45% → 50% → 55% → 60%)离心，取50%‑55%之间的组分2倍溶液B稀释后，经30‑60%连续密度梯度离心，收集第14层组分10倍溶液B稀释，13 000 rpm 离心15 min去除蔗糖后，得到高纯活性蛋白体。本方法提取纯度极高且保持生物活性，为利用蛋白体生物反应器生产活性物质提供了重要技术手段。

主权项

玉米胚乳蛋白体的分离方法，其特征在于该方法的具体步骤为：a.利用蔗糖不连续密度梯度离心法将蛋白体粗提物从玉米籽粒中分离出来；b.通过蔗糖高密度不连续密度梯度和连续密度梯度法，将步骤a所得蛋白体粗提物进一步纯化；c.通过稀释离心法将步骤b所得纯化后的蛋白体粗提物去除蔗糖获得玉米高纯度胚乳蛋白体。