靶向IL-33基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建方法

摘要

本发明针对IL-33基因，设计合成双链DNA片段，连接到慢病毒载体中，制备出重组慢病毒质粒载体，然后将重组慢病毒质粒载体与病毒包装成所需的3个辅助载体共转染到293T细胞中，获得靶向IL-33基因RNA干扰的重组慢病毒载体，为IL-33的进一步研究奠定了良好的基础。由于慢病毒载体免疫原性低，能感染分裂相和非分裂相细胞，将自身携带片断整合入宿主细胞基因组，并在哺乳动物各类细胞稳定表达siRNA，长期抑制基因表达。与质粒载体及其他病毒载体相比，慢病毒介导的RNA干扰具有高效、稳定、特异性强的特点。本发明为体内基因治疗及IL-33基因功能的研究提供了一种新思路。

主权项

靶向IL‑33基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建方法，其特征在于该构建方法包括以下步骤：a.根据IL‑33mRNA序列，设计合成双链DNA片段；b.将合成的双链DNA片段连接到pLVX‑shRNA2载体的多克隆位点中构建成pLVX‑IL‑33‑shRNA2重组载体；c.将构建得到的pLVX‑IL‑33‑shRNA2重组载体与pMDLg pRRE载体、pRSV‑rev载体及pCMV‑VSV‑G载体共转染到293T细胞培养，即得到靶向IL‑33基因RNA干扰重组慢病毒载体；所述的双链DNA片段为以下三种序列中的一种：(1)mus‑IL‑33寡核苷酸序列1：正义链：5'‑gatccACGGGATTCTAGGAAGAGATTCAAGAGATCTCTTCCTAGAATCCCGTTTTTTTACGCGTg‑3'，反义链：5'‑aattcACGCGTAAAAAAACGGGATTCTAGGAAGAGATCTCTTGAATCTCTTCCTAGAATCCCGTg‑3'；(2)mus‑IL‑33寡核苷酸序列2：正义链：5'‑gatccGTGCTACTACGCTACTATGTTCAAGAGACATAGTAGCGTAGTAGCACTTTTTTACGCGTg‑3'，反义链：5'‑aattcACGCGTAAAAAAGTGCTACTACGCTACTATGTCTCTTGAACATAGTAGCGTAGTAGCACg‑3'；(3)mus‑IL‑33寡核苷酸序列3：正义链：5'‑gatccGCCCTGAGTACATACAATGATTCAAGAGATCATTGTATGTACTCAGGGTTTTTTACGCGTg‑3'，反义链：5'‑aattcACGCGTAAAAAACCCTGAGTACATACAATGATCTCTTGAATCATTGTATGTACTCAGGGCg‑3'。