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Procédé d'amplification et de sequençage d'ADN et d'ARN. Le procédé comprend les étapes suivantes: 1) à fusionner un acide nucléïque à double brin pour obtenir une paire de brins d'acide nucléïque complémentaires, 2) à hybrider une amorce à chacun des brins, les amorces étant choisies de telle sorte que la recircularisation de l'amorce sur le brin codant est en 3' par rapport à la position de l'amorce du brin non codant, une des amorces étant marquée de manière à être visualisée independamment de l'autre amorce, 3) à faire amplifier l'acide nucléïque à une polymerase en présence d'un analogue de didésoxynucléotide à l'un des nucléotides présents dans l'acide nucléïque, l'analogue de didésoxy étant présent dans une telle concentration que la majorité des brins d'acide nucléïque nouvellement synthétisés sont terminés par l'incorporation de didésoxynucléotides sans s'étendre assez loin pour agir comme gabarits de synthèse du brin opposé au moyen de la seconde amorce, 4) à répéter les étapes 1 à 3 séquentiellement un certain nombre de fois, 5) à répéter les étapes 1 à 4 en utilisant au moins deux autres analogues de didésoxynucléotides des autres 3 nucléotides présents dans l'acide nucléïque et 6) à séparer par électrophorèse les produits de réaction de chacune des répétitions des étapes 1 à 4 et à visualiser les brins marqués. L'autre des nucléotides d'au moins une partie du brin de l'acide nucléïque, sur lequel l'amorce marquée recircularisée entre les sites de liaison, peut être déterminé en comparant les gels séparés et visualisé pour chacun des analogues de nucléotides utilisés. |
