利用玻璃化超低温离体保存扁桃休眠芽的方法

摘要

本发明属于果树栽培和植物组织培养技术领域，具体涉及一种利用玻璃化超低温离体保存扁桃休眠芽的方法。本发明公开了一种利用玻璃化超低温离体保存扁桃休眠芽的预处理液、装载培养液、洗涤液、玻璃化液、生长培养基和恢复培养基。所述步骤为：1)从健康扁桃植株上剥取含1‑2个叶原基的0.6～1.5mm休眠芽茎尖，放入预处理液中预培养1d；2)室温下用装载液装载20min，0℃下用玻璃化液处理70min，再加入少量新鲜玻璃化液后迅速投入液氮罐，保存15d后取出；3)40℃水浴锅中化冻2～3min，用洗涤液卸载30min，吸干洗涤液后转至恢复培养基24℃暗培养7d后转光照下培养。本发明的成活率可达61.01％。

主权项

一种利用玻璃化超低温离体保存扁桃休眠芽的方法，其特征在于：包括配制预处理液、装载培养液、洗涤液、玻璃化液PVS₂、生长培养基和恢复培养基；预处理液：MS，附加0.5mol/L蔗糖；用蒸馏水定容至1L；装载培养液：MS，附加2mol/L甘油和0.4mol/L蔗糖；用蒸馏水定容至1L；洗涤液：MS，附加1.2mol/L蔗糖；用蒸馏水定容至1L；玻璃化液PVS₂：30％甘油，15％二甲基亚砜，15％乙二醇，0.4mol/L蔗糖；用蒸馏水定容至1L；生长培养基：MS，附加6‑BA 0.3mg/L，IAA 0.5mg/L，用蒸馏水定容至1L，pH值为5.8；恢复培养基：MS，附加6‑BA 0.3mg/L，IAA1.0mg/L，用蒸馏水定容至1L，pH值为5.8；按照以下步骤：(1)从健康扁桃植株上剥取含有1‑2个叶原基的0.6～1.5mm休眠芽茎尖，放入所述的预处理液中预培养1d；(2)在室温下用所述的装载培养液装载20min，于0℃下用玻璃化液PVS₂处理70min，加入少量新鲜的玻璃化液PVS₂后迅速投入液氮罐，保存15d后取出；(3)在40℃水浴锅中化冻2～3min，用所述的洗涤液卸载30min，无菌纸吸干洗涤液后转至恢复培养基中，于24℃下暗培养7d后转移至光照强度为3000lx的光照下培养。