一种基于脱碱基位点的免标记凝血酶检测方法

摘要

本发明提供了一种基于脱碱基位点的免标记凝血酶检测方法。该检测方法采用由SEQ ID No:1～2所示序列合成双链DNA，将脱碱基位点和凝血酶适配体同时引入到双链DNA中，其与有机配体形成复合物后用于凝血酶浓度的检测。本发明所述双链DNA，与以往相比，延长了凝血酶适配体3’端的长度，并在延长部分设计AP位点对应的靶碱基，而且与适配体链部分匹配的DNA单链只有10个碱基(含AP位点)。在保证检测灵敏度的同时，节约了检测成本。另外，使用本发明的检测方法对凝血酶进行检测，对凝血酶的特异性高，且避免了传统DNA探针中标记、清洗的操作步骤，节约了检测时间。

主权项

一种基于脱碱基位点的免标记凝血酶检测方法，包括如下步骤：(1)具有SEQ ID No:1～2的单链DNA于缓冲溶液中进行退火处理形成双链DNA；(2)在步骤(1)得到的双链DNA中加入有机配体，混合，5℃下温育5～20min，形成有机配体/DNA复合物；(3)在步骤(2)的有机配体/DNA复合物中加入含有凝血酶的待测样品，混合，在5℃下温育10～30min，在352nm的激发波长下进行荧光检测；其中所述的有机配体为2‑氨基‑6,7‑二甲基‑4‑羟基蝶啶、2‑氨基‑4‑羟基蝶啶中的一种。