一种抗氧化胶原肽的制备方法

摘要

本发明属于食品生物技术领域，具体涉及一种抗氧化胶原肽的制备方法。主要技术方法如下：在37°C条件下，将胶原质和人工胃液（根据美国药典配制）混合后、振荡条件下模拟胃消化，然后用NaOH调节pH到6.8，加入胰酶继续模拟小肠消化之后，沸水浴后终止反应，离心取上清。利用截留分子量为1 kDa的膜超滤分离该消化液，收集滤出液直至其在220 nm处吸光值接近为0，浓缩，干燥，再溶解后上样于Toyopearl SP‑650M柱，用含NaCl的HAc‑NaAc缓冲液线性洗脱。收集洗脱活性组份，浓缩后再上样于Sephadex G10柱，用蒸馏水洗脱，收集活性洗脱组分浓缩干燥后所得无臭、无味、白色的粉沫，即为目标抗氧化胶原肽。

主权项

一种抗氧化胶原肽的制备方法，其特征在于，按照以下步骤进行：（1）胶原质的体外膜拟胃肠道消化：配制人工胃液；在37°C条件下，将胶原质和胃液混合，在振荡条件下模拟胃消化，然后用NaOH调节pH，加入胰酶至混合液中，继续模拟小肠消化；消化结束后，进行沸水浴，终止反应后离心取上清；（2）抗氧化胶原肽的分离纯化：① 膜分离：利用截留分子量为1 kDa的膜超滤分离上述消化液，收集滤出液直至其在220 nm处吸光值接近为0，然后旋转蒸发浓缩、冷冻干燥；② 柱层析：将上述膜分离所得组分上样于HAc‑NaAc缓冲液平衡的离子交换柱，用含有NaCl的相同缓冲液进行线性洗脱；以DPPH自由基清除率为指标收集活性洗脱组分，浓缩后再上样于分子排阻柱，蒸馏水洗脱，收集活性洗脱组分浓缩、干燥后所得无臭、无味、白色的粉末，即为目标抗氧化胶原肽；步骤（1）中所述胶原质与胃液比例为1g:10‑25mL；所述振荡频率为120‑180 rpm；所述模拟胃消化时间为2‑4 h；所述pH为6.8；所述胰酶和混合液的比例为1g:100mL；所述模拟小肠消化时间为4‑6 h；所述沸水浴时间为10‑15 min；所述离心为10000 g以上离心10‑20 min。