一种空肠弯曲菌快速定量检测试剂盒及使用方法

摘要

本发明涉及生物检测技术，旨在提供一种空肠弯曲菌快速定量检测试剂盒。该试剂盒包括多个冻存管，其中冻存管A装有冻干粉，其成分包括探针法荧光定量PCR预混液试剂，以及用于荧光定量检测的两条引物和一条探针；5个冻存管B分别装有无菌双蒸水；5个冻存管C分别装有TZ裂解液；冻存管D～J共7个，分别装有不同浓度的空肠弯曲菌标准品DNA冻干粉，空肠弯曲菌浓度按十倍递减。本发明空肠弯曲菌快速定量检测试剂盒是基于对空肠弯曲菌mapA基因设计引物探针以及检测条件的优化而实现的。空肠弯曲菌快速定量检测方法可在短时间内检测并定量样品中的空肠弯曲菌数量，最低检测下限可达102CFU/mL，具有很好的特异性、灵敏性和准确性，方便快捷易操作。

主权项

一种空肠弯曲菌快速定量检测试剂盒，其特征在于，包括多个冻存管，各冻存管的数量和其中内容物具体是：(1)序号为A的冻存管1个，装有冻干粉，其成分包括探针法荧光定量PCR预混液试剂，以及用于荧光定量检测的两条引物和一条探针：引物CJ‑F：5’‑TGTCAAGCACAACTATTCCTC‑3’引物CJ‑R：5’‑TAAAAGAAGGGCAAAAGGT‑3’探针Taqman：5’‑FAM‑ACCGCATTAAAATTCACATCGACA‑TAMRA‑3’；该冻干粉通过下述方法制备获得：取探针法荧光定量PCR预混液试剂1mL、所述两条引物各0.9nM、探针Taqman 0.2nM，混匀后冻干，备用；(2)序号为B的冻存管5个，分别装有无菌双蒸水2mL；(3)序号为C的冻存管5个，分别装有TZ裂解液1mL；(4)序号为D～J的冻存管，共7个，分别装有不同浓度的空肠弯曲菌标准品DNA冻干粉；其中，序号为D的冻存管中是空肠弯曲菌浓度为10⁸CFU/mL的菌液DNA，序号为E的冻存管中是冻存管D中的菌液稀释十倍后菌液的DNA，依次类推。