运用PCR引物检测雀麦上雀麦腥黑粉菌的方法

摘要

本发明涉及运用PCR引物检测雀麦(Bromus spp.L)上雀麦腥黑粉菌(Tilletia bromi)的方法，属于禾本科草种病原真菌检测领域。本发明设计合成了4套引物，包括通用外套引物、通用内套引物、T.bromi的外套引物和特异引物。通用外套引物用于Tilletia属菌丝基因组DNA或冬孢子套式扩增，通用内套引物用于Tilletia属冬孢子的套式扩增，这两套引物用于扩增过程质量监测，避免检测过程中的假阴性。设计T.bromi区别于T.controversa、T.caries和T.fusca的特异引物，可用于菌丝基因组DNA常规PCR和冬孢子套式PCR特异扩增，外套引物与特异引物套式扩增冬孢子DNA。本发明建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高、准确可靠的雀麦上T.bromi的分子检测方法，一个工作日内完成整个检测。

主权项

1.一种运用PCR引物检测雀麦上雀麦腥黑粉菌(Tilletia bromi)的方法，其特征在于，所设计的引物和用途如下：(1)设计Tilletia属通用引物，序列如下：通用外套引物：IGSUF1：GGA TGC ATT CTG GGG ACG T IGSUR1：GTA GCC TTG TTG CTA CGA TCT G通用内套引物：NIGSUF1：CAC CGC CCA AGC ACG TAC NIGSUR1：GAC CTT TTG GGG TCA AAC TTC TC通用外套引物用于菌丝基因组DNA或冬孢子套式扩增，通用内套引物用于冬孢子的套式扩增，这两套引物用于扩增过程质量监测，检查所抽提的菌丝基因组DNA质量和冬孢子的挑取和破碎，避免检测过程中的假阴性；(2)设计T.bromi区别于TCK、TCT和T.fusca的特异引物以及外套引物，序列如下：外套引物：tubkF1：GCT CTT CGA GAC GTA CCT tubkR1：GGC AAA CAT GAC GGG AAA TC特异引物：BBSF：GGT GGC AAA CAT GGC CAT T BBSR：CTC AAA CAT GGC AAA TC特异引物用于菌丝基因组DNA常规PCR，外套引物与特异引物套式扩增冬孢子DNA。