一种测定人血浆和/或血清中重组双功能水蛭素的方法

摘要

本发明属医学检验领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种测定人血浆/血清中重组双功能水蛭素的分析方法。本方法采用超滤法分离蛋白，解决了水溶性的水蛭素和蛋白的分离问题；采用冷冻干燥技术，使血样中微量的水蛭素得以富集；采用质谱检测器，明显提高了检测的选择性和灵敏度；整个色谱分析过程时间为15min以内。本方法样品取样少，前处理简单、快速、灵敏，分析周期短，可使水蛭素测定的选择性提高，灵敏度提高两个数量级，适合于重组双功能水蛭素体内药物的浓度测定。本方法还可对游离重组双功能水蛭素的浓度进行测定。

主权项

1.一种测定人血浆和/或血清中重组双功能水蛭素的方法，其特征是采用超滤法和冷冻干燥法对待测样品进行预处理，在分析色谱柱分离后用质谱检测器检测，包括以下步骤：(1)蛋白分离水溶性的水蛭素样品与血浆蛋白的分离：以20％甲酸水溶液酸化并稀释血样，混匀后置于超滤管Millipore，50K于4000g，25℃条件下超滤20min；(2)样品富集水蛭素的浓缩：超滤液置于1.5ml Eppendorf管中，-70℃条件下冷冻干燥，完全冻干后取出，-70℃条件下保存；(3)样品分析将冻干后的样品取出，加入10％甲酸50μl复溶解，10μl进样做LC/MS分析，色谱条件：采用填料为十八烷基键合相硅胶为填料的液相色谱柱，高效液相系统采用通用型高压泵，流动相采用甲醇和0.1％甲酸溶液，梯度洗脱；质谱条件：单级四极杆质谱检测器，电喷雾离子源，正离子模式下选择离子监测M/Z 1433，干燥气流速：13L/min，雾化气压力：50psig，干燥气温度：350℃，碎片电压：220V，毛细管电压：5500V。内标法定量。