基于PGM和磁性纳米微球快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法

摘要

本发明公开了基于PGM和磁性纳米微球快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法，包括以下步骤：用化学共沉淀法合成磁性二氧化硅纳米微球；完成磁性二氧化硅微球的氨基硅烷化；然后与戊二醛反应，离心分离得到醛基化的磁性二氧化硅微球；再与阪崎克罗诺杆菌多克隆抗体结合，制得表面修饰有阪崎克罗诺杆菌抗体的免疫磁珠；取免疫磁珠与检测样本菌悬液混合，37℃下孵育45 min后，用磁铁吸附2 min，分离上清和磁珠，加入葡萄糖的营养肉汤培养液，37℃培养7 h后，用电流型便携式葡萄糖传感器检测并计算各培养物中葡萄糖浓度的变化(ΔC)，ΔC=C₁－C₂，最后根据线性方程为ΔC(mmol/L)=5.36lg[CFU·ml^‑1]‑5.74，计算被检测样本中阪崎克罗诺杆菌的数量，实现定量检测。

主权项

基于PGM和磁性纳米微球快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用化学共沉淀法合成磁性二氧化硅纳米微球；(2)将磁性二氧化硅纳米微球选混于乙醇中，完成磁性二氧化硅微球的氨基硅烷化；然后将氨基硅烷化的磁性二氧化硅微球与戊二醛反应，离心分离得到醛基化的磁性二氧化硅微球；将醛基化的磁性二氧化硅微球颗粒与阪崎克罗诺杆菌多克隆抗体结合，制得表面修饰有阪崎克罗诺杆菌抗体的免疫磁珠；(3)取步骤(2)所得免疫磁珠60μL，加入到1mL检测样本中，37℃下孵育45min后，用磁铁吸附2min，分离上清和磁珠，弃除上清，加入PBS洗涤，混合均匀，用磁铁吸附2min，分离上清和磁珠，弃除上清，重复洗涤3次，每个离心管中加入200μL含20.0mmol/L葡萄糖的营养肉汤培养液，37℃培养7h后，用电流型便携式葡萄糖传感器检测并计算各培养物中葡萄糖浓度的变化ΔC，ΔC＝C₁－C₂，C₁为0h培养物中葡萄糖浓度，C₂为7h培养物中葡萄糖浓度；(4)根据线性方程为ΔC(mmol/L)＝5.36lg[CFU·ml^‑1]‑5.74，计算检测样本中阪崎克罗诺杆菌的数量。