发明名称 |
纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌融合子的多重PCR鉴定方法 |
摘要 |
本发明涉及生物检测技术领域,具体为一种纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌融合子的多重PCR鉴定方法,包括将纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的原生质体进行融合,得到融合子,挑取菌落用于鉴定;制备模板,进行芽孢杆菌特异性引物设计和乳酸菌特异性引物设计,组成多重PCR引物;通过建立的多重PCR反应体系,对待测样品进行多重PCR扩增,最后对PCR产物使用凝胶电泳法进行检测、分析;多重PCR扩增的反应条件为:94℃预变性5min;94℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸60s,共30个循环;产物末端72℃延伸7min;多重PCR扩增的反应体系为:模板DNA 1ng/μL,每条引物0.4μM,dNTPs 0.25mM,Taq酶0.06U/μL。该方法简便,快速,特异性好,适用于芽孢杆菌、乳酸菌以及二者融合子的快速鉴定。 |
申请公布号 |
CN105950756A |
申请公布日期 |
2016.09.21 |
申请号 |
CN201610437232.2 |
申请日期 |
2016.06.20 |
申请人 |
山西农业大学 |
发明人 |
霍乃蕊;花锦;张琳;武朝霞;杨乔木 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/04(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
太原晋科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 14110 |
代理人 |
王瑞玲 |
主权项 |
一种纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌融合子的多重PCR鉴定方法,其特征是包括将纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌进行融合,得到融合子,挑取菌落用于鉴定;制备模板,进行芽孢杆菌特异性引物设计和乳酸菌特异性引物设计,组成多重PCR引物;通过建立的多重PCR反应体系,对待测样品进行多重PCR扩增,最后对PCR产物使用凝胶电泳法进行检测、分析;上述步骤中,所述纳豆芽孢杆菌引物的碱基序列为:上游引物 P1: 5’‑CATCATCGCAAAGCAGTA‑3’,如SEQ ID NO.1所示,下游引物P2:5’‑AAACAACGAGGAAATGGA‑3’,如SEQ ID NO.2所示,对应的扩增产物大小为308bp;所述嗜酸乳杆菌引物的碱基序列为:上游引物 P3:5’‑ACGAGGTGGGTTAGAATC‑3’,如SEQ ID NO.3所示,下游引物P4:5’‑TTGAGTGCCTTAGTTTGC‑3’,如SEQ ID NO.4所示,对应的扩增产物大小为576bp。 |
地址 |
030801 山西省晋中市太谷县铭贤南路兴农街1号 |