一种脂肪干细胞的提取方法

摘要

本发明公开了一种脂肪干细胞的提取方法，包括以下步骤：抽取人体脂肪到离心管中，加生理盐水混匀后离心，将沉积层弃掉；再次加入生理盐水混匀后离心，将沉积层弃掉；然后向离心管中加EDTA‑胰蛋白酶和I型胶原酶，混匀后放入恒温摇床中消化；取出离心管，加入无血清培养基终止消化，混匀，离心，将脂肪层和中间层弃掉；再加生理盐水，混匀后离心，弃掉上清液；加入培养基混匀，然后转移到细胞培养皿中；待繁殖、传代后，回收，检验，合格即得。本发明提出的一种脂肪干细胞的提取方法，提取过程中无需机械破碎，操作简单，成本低，所得脂肪干细胞纯度高，数量高，繁殖传代快且存活率高，可广泛应用于整形美容行业。

主权项

一种脂肪干细胞的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、抽取人体脂肪，分装到50ml离心管中，每支离心管分装18～20ml脂肪，然后向每支离心管中加生理盐水至40～45ml；S2、用吸管将步骤S1中离心管里的脂肪和生理盐水吹吸混匀，以500～1500r/min的转速离心4～8min，然后静置3～5min；S3、将吸管伸入经步骤S2静置后的离心管底部，将沉积层吸取弃掉，然后再加入生理盐水至40～45ml；S4、将步骤S3中离心管里的脂肪和生理盐水吹吸混匀，以500～1500r/min的转速离心4～8min，静置3～5min，再用吸管伸入离心管底部，将沉积层吸取弃掉；S5、将步骤S4中剩余的脂肪调整到每支离心管12～16ml，然后向离心管中加EDTA‑胰蛋白酶8～16ml，再加I型胶原酶2～4ml，吹吸均匀后放入恒温摇床中消化0.8～1h；S6、取出步骤S5中的离心管，向每支离心管中加10～15ml的无血清培养基终止消化，吹吸混匀，以1500～2500r/min离心3～6min，静置3～5min后，将脂肪层和中间层弃掉，留下底部细胞层；S7、向步骤S6中得到的底部细胞层中加生理盐水至40～45ml，吹吸混匀，以1500～2500r/min离心3～6min，静置3～5min后，弃掉上清液；S8、将步骤S7中所得的细胞加入10～15ml的培养基混匀，然后转移到细胞培养皿中，静置70～75h后换液；S9、步骤S8中的细胞繁殖至一定数量时进行传代，待细胞传至第5代，且第5代细胞达到规定数量时回收，进行检验，检验合格后提供给客户进行回输或面部注射。