蛋白质N末端肽段的在线分离装置及使用方法

摘要

本发明属于生物分析和检测技术领域，具体为一种蛋白质N末端肽段的在线分离装置及使用方法。该装置包括：两台高压泵、六通阀、四通阀、三通阀、C18柱和巯基肽段捕集柱以及相关连接部件。本发明中，蛋白质固定于填充C18疏水性填料的毛细管柱中，进而进行柱上氨基封闭，柱上酶解，酶解肽段固相巯基衍生，巯基肽段捕集柱捕集非N末端肽段，实现N末端肽段的在线分离。固相的蛋白封闭反应可以减少除盐过程中的损失，简化实验步骤，缩短样品反应时间；同时，可以通过采用过量的衍生试剂，实现肽段高效快速的巯基衍生。本发明通过在线装置，使得反应时间缩短，减少样品转移，减少样品损失，缩短除盐等预处理步骤的耗时，提高蛋白质N末端肽段鉴定效果。

主权项

一种蛋白质N末端肽段的在线分离装置，其特征在于，包括：两台高压泵、一个六通阀、一个四通阀、一个三通阀、一个C18柱和一个巯基肽段捕集柱以及相关连接部件；其中，六通阀有6个接口，第一高压泵和六通阀的6号口相连，六通阀的3号口为进样口，进样环连接于六通阀的1号口和4号口之间，C18柱连接于六通阀的5号口和四通阀的2号口之间，六通阀的3号口和四通阀的1号口连接废液瓶子，第二高压泵、四通阀的3号口和巯基肽段捕集柱用三通阀相连；其中，第一高压泵有A、B、C和D共4个相位，分别对应于A、B、C和D 4个相：A相为去离子水；B相为氨基封闭试剂，由甲醛和氰基硼氢化钠配制而成，甲醛浓度为0.2‑3 M，氰基硼氢化钠浓度为0.1‑1.5 M；C相为三乙基碳酸氢铵溶液,浓度为20 mM‑1 M；D相为含0.1%三氟乙酸的乙腈。