PROCESO PARA LA PREPARACION DE UNA NUEVA AMINOPEPTIDASA Y SU PROTEINA

摘要

UNA NUEVA AMINOPEPTIDASA SEPARADA DE UN CULTIVO MEDIO DE STREPTOMUCES THERMONITRIFICANS. 2. LA AMINOPEPTIDASA DE LA REIVINDICACION 1 QUE COMPRENDE UNA SECUENCIA DE AMINO ACIDO DE Lys-Phe- Ser-Lys-Lys-Phe--Asn-Glu EN LA N-TERMINAL Y LA SE- CUENCIA DEL AMINO ACIDO DE Glu-Pro-Gly-Thr-Gly- Ala-Leu-Glu-Pro y Asn-Pro-Asp-lle-Val-Thr y OTRAS REGIONES. 3. LA AMINOPEPTIDASA DE LA REIVINDICACION 1 TENI- ENDO UN PESO MOLECULAR DE UN RANGO DE 41 A 45 kd EN UN ESTADO DE FORMA REDUCIDA Y UN PESO MOLECULAR EN EL RANGO DE 36 A 40 kd EN UN ESTADO DE FORMA NATURAL. 4. LA AMINOPEPETIDASA DE LA REIVINDICACION 1 TENI- ENDO CONDICIONES DE ACTIVIDAD DE UN Ph DENTRO DEL RANGO DE 7.5 A 9.0 Y TEMPERATURA ENTRE UN RANGO DE 30 A 50 GRADOS CENTIGRADOS. 5. UN PROCESO PARA PREPARAR UN AMONOPEPTIDASA DE- FINIFO EN CADA UNA DE LAS PETICIONES 1 A 4 COM- PRENDIENDO LOS PASOS DE CULTIVACION STREPTOMYCES THERMONITRIFICANS EN UN MEDIO QUE CONTIENE GALAC- TOSA COMO UNA FUENTE DE CARBON Y RECOBRANDO LA AMINOPEPTIDASA DE UN CULTIVO MEDIO. 6. EL PROCESO DE LA REIVINDICACION 5 EN DONDE LA CONCENTRACION DE LA GALACTOSA EN LOS MEDIOS RANGOS DE 1 A 5% POR PESO SOBRE LA BASE DEL PESO TOTAL DEL MEDIO. 7. EL PROCESO DE LA REIVINDICACION 5 0 6 QUE ADE- MAS COMPRENDE LOS PASOS DE : a) CENTRIFUGACION DEL CULTIVO DE LA STREPTOMYCES THERMONITRIFICANS Y SEPARANDO LA SUPERNATA DE ESTE b) AGREGANDO SULFATO DE AMONIO A LA SUPERNATA; c) LLEVANDO A CABO UNA PARTICION TRIFASICA ANADI- ENDO BUTANOL TERCIARIO A LA SUPERNATA Y SEPARANDO UNA SOLUCION CLARA COMO LA CAPA INFERIOR; d) AGREGANDO SULFATO DE AMONIO A LA SOLUCION CLARA Y REPITIENDO EL PASO c) PERO SEPARANDO UNA CAPA INTERMEDIA ENTRE DICHO BUTANOL TERCIARIO Y DICHA CAPA AQUOSA; e) SOMETIENDO LA CAPA INTERMEDIA OBTENIDA EN DICHO PASO d) CAMBIAR EL CATION DE CROMATOFRAGIA PARA OBTENER FRACCIONES QUE CONTIENE LA AMINOPEPTIDASA; Y f) CONDUCIENDO FPLC CON RESPECTO A LAS FRACCIONES PARA OBTENER LA AMINOPEPTIDASA EN UN ALTO GRADO DE PUREZA 8) EL PROCESO DE LA REIVINDICACION 7 EN DONDE DI- CHO SULFATO DE AMONIO ES ANADIDO EN DICHOS PASOS b) y d) PARA CONCENTRACIONES DE RANGOS DE 35 A 50 (wt/vol) Y DE 80 A 90% (wt/vol) RESPECTIVAMENTE. 9. EL PROCESO DE LA REIVINDICACION 7 EN DONDE DI- CHO CAMBIO CROMATOGRAFIA DE CATION ES CONDUCIDO MEDIANTE EL EMPLEO DE UNA COLUMAN S-SEFAROSA. EL PROCESO DE LA REIVINDICACION 7 DONDE DICHA COLUMNA FPLC DE CROMATOGRAFIA ES CONDUCIDA EMPLE- ANDO UNA COLUMNA FPLC MONO-S. 11. UN PROCESO PARA PREPARAR UNA PROTEINA RECOMBI- NANTE N-METIONO CON LA AMINOPEPTIDASA CITADA EN LA REIVINDICACION 1 EN UNBUFFER DE REACCION.