D–胺基醯化 及其制法

摘要

由土壤中筛选所得强力之D-胺基醯基水解(亦称胺基醯化)生产菌DA-1监定为Alcaligenes faecalis DA-1当培养于含1%N- acetyl-DL-leucine，0.5%yeast extract，0.5%peptone，0.1%K2HPO4和0.05%MgSO4，7H2O，pH8.0之培养基中，每毫升可生产4.2单位之D-胺基醯基水解及0.3单位之L-胺基醯基水解。D-胺基醯基水解经以DEAE-Sephadex管柱层析，分子筛过滤层析及离子交换高效液态层析精制，以SDS-polyacrylamide gel electropho-resis决定其分子量为55000。N-acetyl-D-methionine为其最佳基质，其次为N- acetyl-D-phenylalanine。此酵素之光学特异性极高，对各种N- acetyl-L-amino acid几乎都不反应。以N-acetyl-D-methionine做基质决定其比活性为500单位/毫克蛋白质。

主权项

1﹒一种D-胺基醯化腌,具有下列特性:(1) 基质特异性:可水解N-醯基-D-胺基酸,而不水解N-醯基-L-胺基酸;(2) 分子量:55,00O (SDS-PAGE)55,000(Gel-filtration)(3) 等电点:5.35(4) 金属离子影响:受Hg2",CUZ",Co2"所抑制;(5) 抑制剂:受对一氮汞基苯甲酸,N-乙基-顺丁烯二酸亚醯胺,EDTA所抑制。2﹒一种D-胺基醯化 之制备方法,包括下列步骤:(1) 培养 Alcaligenes farcalis DA-1及其突变抹在适当的培养基中进行;其中添加N-醯基-DL-胺基酸,以提高D-胺基醯化 产量;(2) 上述所得D-胺基醯化 经分离及精制所成。3﹒如申请专利范围第2项之制法,其中N-醯基-DL-胺基酸使用量为1%左右。4﹒如申请专利范围第2项之制法,其中D-胺基醯化 之精制系DDEAE-Sephadex管柱层析,分子筛过滤层析或离子交换高效液态层析达成。图示简单说明:图1温度对D-aminoacvyase 热安定性之影响。图2D-aminoacylase 之pH安定性。图3pH値对D-aminoacylase 活性之影响。图4温度对D-aminoacylase 活性之影响。