抗人淋巴细胞球蛋白制备方法

摘要

本发明涉及抗人淋巴细胞球蛋白制备方法,其特征在于它采用人胸腺或胸导管引流液或人血中的T淋巴细胞为抗原,免疫家兔或马,分离免疫血清,用缓冲剂或生理盐水稀释加入醛化人血小板、红细胞和胎盘组织,除杂抗体,再用乙醇沉淀和离子交换或用正辛酸和硫酸铵提纯,得到95%以上纯度的抗人淋巴细胞球蛋的产品,该方法有效的除去杂抗,降低毒副作用,纯度高,治疗效果好。

主权项

1.抗人淋巴细胞球蛋白制备方法，其特征在于它按下述步骤进行：a)采用人胸腺或胸导管引流液或人血中的T淋巴细胞液为抗原与福氏完全佐剂充分混合进行一次基础免疫家兔或马，再与不完全佐剂充分混合加强免疫家兔或马2-4次，采集血液测定血清的免疫效价达到1∶400时，停止免疫，并分离合格免疫血清；b)在(a)项的合格免疫血清中用磷酸盐缓冲液或用生理盐水稀释1-3倍后，加入醛化的其浓度为105-108细胞/ml人血小板、红细胞和胎盘组织混合3-4小时，离心除去血浆中的抗血小板、抗红细胞抗体及其它杂抗体，收集上清液，即得到初级抗人淋巴细胞球蛋白血清；c)然后在(b)项的初级抗人淋巴细胞球蛋白血清中加入-5℃乙醇进行沉淀，使其最终浓度为19％，搅拌后静置1-2小时，离心分离，收集沉淀，尾弃上清液，再将沉淀用DEAE平衡缓冲液溶解制成悬液，然后把悬液加入到DEAE离子交换柱进行层析，再用缓冲液洗涤，直至无球蛋白为止后用0.1-1.0M的氯化钠溶液梯度洗脱，收集球蛋白峰，经超滤脱盐浓缩，即得到提纯的抗人淋巴细胞球蛋白液体，再加入赋型剂后除菌过滤，收集滤液；d)最后将滤液分装或冻干即为成品。