| 主权项 |
1﹒一种非复制重组体制造之HIV─1粒子,其包括经 组装之HIV─1核 心及包膜蛋白质,但不含能导引所有逆转录病毒复 制所需基因产物表现之 完整逆转录病毒基因组。 2﹒根据申请专利范围第1项之外复制重组体制造 之HIV─1粒子,其中人 烦免疫缺失病毒1型核心蛋白质包括p24。 3﹒根据申请专利范围第1项之外复制重组体制造 之HIV─1粒子,其中人 烦免疫缺失病毒1型核心蛋白质包括p24及p17。 4﹒根据申请专利范围第1项之外复制重组体制造 之HIV─1粒子,其中的 HIV─1包膜蛋白质包括gp41。 5﹒根据申请专利范围第1项之外复制重组体制造 之HIV─1粒子,其中人 烦免疫缺失病毒1型包膜蛋白质包括gp41及gp120。 6﹒根据申请专利范围第1项之外复制重组体制造 之HIV─1粒子,其中的 HIV─1包膜蛋白质包括gp160。 7﹒根据申请专利范围第6项之外复制重组体制造 之HIV─1粒子,其中g p160未解离生成gp120及gp41。 8﹒根据申请专利范围第6项之外复制重组体制造 之HIV─1粒子,其中g p160以v─ED2或v─ENV5DCT中之形式被截断,v─DE 2包括完整之gp120编码序列及gp41之N端241个胺基酸 残基 ,而v─ENV5DCT包括完整之gp120编码序列及除c─端13 个残基之gP41序列。 9﹒根据申请专利范围第7项之外复制重组体制造 之HIV─1粒子,其中g p160以v─ED2或V─ENV5DCT中之形式被截断,v─DE 2包括完整之gp120编码序列及gP41之N端241个胺基酸 残基 ,而v─ENV5DCT包括完整之gp120编码序列及除c─端13 个残基之gp41序列。 10﹒一种于活体外减低人类免疫缺失病毒1型对CD4 淋巴细胞之感染力的 方法,此方法包括以根据申请专利范围第1项之非 复制重组体制造之H IV─1粒子处理淋巴细胞,其剂量可有效地抑制人类 免疫缺失病毒1 型感染。 11﹒一种产制根根申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以(i)至少一个带有HIV─ len v基因之重组体牛痘苗病毒及(ii)至少一个带有HIV ─1gag 及蛋白基因之重组体牛痘苗病毒,共同感染于哺 乳动物宿主细胞;( b)在经感染之哺乳动物宿主细胞中共同表现成熟 的HIV─1env 及gag编码之基因产物;(c)培养经感测之哺乳动物宿 主细胞;及 (d)自培养基中回收非复制重组体制造之HIV─1粒子 。 12﹒根据申请专利范围第11项之方法,其进一步包 括以带有至少一个选自 下列之HIT:1基因:tat、rev、vif、vpr及vpu, 的至少一种重组体牛痘苗病毒感染哺乳动物宿主 细胞。 13﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HlV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以带有HIV─lenv、Rag及蛋 白基因之重组体牛痘苗病毒感染哺乳动物宿主 细胞;(b)于经感染 之哺乳动物宿主细胞中共同表现成熟的HlV─1env及 gag编码 之甚因产物;(C)培养经感染之哺乳动物宿主细胞; 及(d)自培养 基中回收非复制重组体制造之HW─1粒子。 14﹒根据申请专利范围第13项之方法,其进一步包 括以带有至少一种选自 下列之HIV─1基因:tat、rev、vif、vpr及vpu, 之至少一种重组体牛痘苗病毒感染哺孔动物宿主 细胞。 15﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以带有HIV─1env、gag及蛋 白基因之重组体质体转感哺乳动物宿主细胞;(b) 于经感染之哺乳 动物宿主细胞中共同表现成熟的HIV─1env及gag编码 之基因 产物;(c)培养经感染之哺乳动物宿主细胞;及(d)自 培养基中回 收非复制重组体制造之HIV─1粒子。 16﹒根据申请专利范围第15项之方法,其中重组体 质体也带有至少一个选 自下列的其他HIV─1基因:tat、rev、vifvpr及vp u。 17﹒根据申请专利范围第15项之方法,进一步包括 以带有至少一种簨自下 列之HIV─1基因:tat、rev、vif、vpr及rpu,之 至少一种重组体质体转感于哺乳动物宿主细胞。 18﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以(i)带有至少一种HIV─1 en v基因之重组体质体及(ii)带有至少一种HIV─1gag及 蛋白 基因之重组体质体转感哺孔动物宿主细胞;(b)在 经转惑的哺乳动 物宿主细胞中共同表现成熟的HIV─1env及gag编码之 基因产 物;(c)培养经转惑的哺乳动物宿主细胞;及(d)自培 养基中回收 非复制之重组体制造之HIV─1粒子。 19﹒根据申请专利范围第18项之方法,进一步包括 以带有至少一种选自下 列之HIV─1基因:tat、rev、vif、vpr及vpu,之 至少一种重组体质体转感哺乳动物宿主细胞。 20﹒根据申请专利范围第11.13.15或18项之方法,其中 HIV─ lenv基因编码一个未解离的gp160蛋白质。 21﹒根据申请专利范围第11.13.15或18项之方法,其中 HIV─ 1env基因编码一个以V─ED2或V─ENV5DCT中之形式截 断之gP160蛋白质,V─DE2包括完整之gp121)编码序列 及gp41之N端241个胺基酸残基,而V─ENV5DCT包括完 整之gp120编码序列及除c─端13个残基之gp41序列。 22﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之Hiv─1粒 子的方法,此方法包括:(a)以重组体牛痘苗病毒v─ env5(A TCC寄存号为(VR2113)及v─gag2(ATCC寄存号为 VR2265)共同感染于BSC─40宿主细胞,(b)培养经感染 之BSC─40细胞;及(c)自培养基中回收非复制之重组 体制造的 HIV─1粒子。 23﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以重组体牛痘苗病毒V─G 2E5(A TCC寄存号VR2291),感染BSC─40宿主细胞;(b)培 养经感染之BSC─40细胞;及(c)自培养基中回收非复 制之重组 体制造的HIV─1粒子。 24﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组组制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以(i)重组体牛痘苗病毒, 其系加编 码gp120全序列及gp41N端─241个胺基酸之v─ED2及 (ii)重组体牛痘苗病毒v─gag2(ATCC寄存号为VR22 65)共同感染BSC─40宿主细胞;(b)培养经感染之BSC─ 40细胞;及(C)自培养基中回收非复制之重组体制造 的HIV─1 粒子。 25﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以(i)重组体牛痘苗病毒, 其系加编 码Kp120全序列及除C─端13个残基的gp41序列之V─EN V5DCT及(ii)重组体牛痘苗病毒v─gag2(ATCC寄存 号为VR2265)共同感染于BSC─40宿主细胞(b)培养经感 染之BSC─40细胞;及(c)自培养基中回收非复制之重 组体制造 的HIV─1粒子。 26﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以(i)重组体牛痘苗病毒, 其系加编 码突变gp160之V─160NC,该突变gp160中,在gp4 1功能部份前至少四个胺基酸为11e─Glu─Glu─phe, 及 (ii)重组体牛痘苗病毒v─gag2(ATCC寄存号为VR22 65)共同感染BSC─40宿主细胞;(b)培养经感染之BSC─ 40细胞;及(C)自培养基中回收非复制之重组体制造 的HIV─1 粒子。 27﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子的方法,此方法包括:(a)以(i)重组体牛痘苗病毒, 其系如编 码突变gp160之V─11K160NC,该突变Kp160中,在 Kp41功能部份前至少四个胺基酸为11e─Glu─Glu─Ph e,且该突变gp160之表现系在牛痘苗11K起动子之控制 下,及 (ii)重组体牛痘苗病毒v─gaR2(ATCC寄存号为VR22 65)共同感染BSC─40宿主细胞;(b)培养经感染之BSC─ 40细胞;及(c)自培养基中回收非复制之重组体制造 HIV─1粒 子。 28﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以重组体质体CmHIVdelKpn Avr(Gag2TRE)(1160─a1)(NRRL寄存号为B ─18742)及CmHiEnv5(1104─b1)(NRRL寄 存号为B─18741)共同转感于哺乳动物细胞;(b)于经 转感之 CHO细胞中共同表现成熟的HIV─1env及gag编码之基因 产 物(C)培养经转感之CHO细胞;及(ii)自培养基中回收 非复制 之重组体制造的HIV─1粒子。 29﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以重组体质体CmHIVdelKpn Avr(Gag2TRE)(1160─a1)(NRRL寄存号为B ─18742)转感于哺乳动物细胞;b)于经转惑的CHO细胞 中共 同表现成熟的HIV─1env及)gag编码之基因产物c)路养 经 转感之CHO细胞;及d)自培养基中回收非复制之重组 体制造之HI V─1粒子。 30﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以重组体质体CmHIGag2Rre )(1158─a1)及CmHIVdelXmn(1133─a1) 共同转感于哺乳动物细胞;(b)于经转感之CHO细胞中 共同表现成 熟的HIV─1env及gag编码之基因产物c)培养经转感之 CH O细胞;及(d)自培养基中回收非复制之重组体制造 的HIV─1粒 子。 31﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以重组体质体CmHIVdelXmn (1133─a1)及CmHGag2Rre)(1159─a1)共 同转感哺乳动物细胞;(b)于经转感之CHO细胞中共同 表现成熟的 HIV─1env及gag编码之基因产物c)培养经转感之CHO细 胞;及(d)自培养基中回收非复制之重组体制造的HIV ─1粒子。 32﹒一种产制根据申请专利范围第1项之非复制重 组体制造之HIV─1粒 子之方法,此方法包括:(a)以重组体质体CmHiGag2Rre )(1158─a1),CmHiEnv5,CmHITat及CmH iRev共同转感哺乳动物细胞;(b)于经转感之CHO细胞 中共同 表现成熟的HIV─1env及gag编码之基因产物C)培养经 转感 之CHO细胞;及d)自培养基中回收非复制之重组体制 造的HIV─ 1粒子。图示简单说明 图1HIV-1蛋白质之放射免疫沈淀 分析,表现于被重组体牛痘苗病毒感染之 BSC一40细胞上。 图HIV包膜蛋白质之细胞表面区域 化由受感染之BSC-40细胞所合成。 图3含有HIV一1gag及env蛋白质之 重组体HIV粒子之分离。 图4以薄片电子显微镜及免疫电子显 微镜分析已组装之重组体HIV-1粒子。 图5重组体制造之HIV-1粒子之核 酸含量,以下文中6.2.4所述之点吸渍杂 交法决定。A图:gag-特异探针。B图 :env-特异探针。C图:划出之线表示 分别用于制备重组体牛痘苗病毒v一gag2 及V一env5之gag一pol基因(258一 3317)及env基因(5671一8572)。箭号 表示gag-pol基因上游处之RNA包装序 列位置(300一319)(lever et a1., 1989, j. Virol.63:4085-4087)。 图6图示质体PV一G2G5之构筑。 图7重组体牛痘苗病毒所感染细胞之 西方墨点。 图8重组体制造之HIV一1粒子之放 射免疫沈淀分析,粒子系由感染有V- G2E5之BSL一40细胞所产生。 图9图示质体载体载体,其述于下文 8.1部份。 图10由转感的CHO细胞所产生之重组 体制造之HlV-1粒子之免疫反应性。 图11HeLa细胞上所表现之HIV-特异 抗原之分析,细胞以编码HIV一1 env、 tat及rev基因之质体载体转感。 图12经重组体牛痘苗病毒感染细胞之 西方墨点。 图13分析重组体制造之HIV粒子对T -淋巴母细胞之感染力。A图:CEM细胞 与重组体制造之HIV-1粒子培育。B图 :CEM细胞与HIV病毒共培育,显示阳性 萤光。C图:CEM细胞与HIV病毒培育之 融合细胞。 图14收集自New Zealand自免血清样 品中之相对抗体效价,系以(A)重组体制 造之HIV-1粒子,及(B)补骨脂内脂 (Psoralen)-灭活之HIV-1免疫接种, 并以ELISA决定。分析细节详述于下文 14.1部份。 图15于经免疫动物中体液免疫反应。 图16免子血清对CEM细胞HIV-1感 染力之中和作用。 图17抗体与个别病毒蛋白质之反应性 ,系以西方墨点分析来决定。所使用之实 验步骤详情及结果之讨论,示于下文中 14.2.4部份。 图18HeLa细胞之共焦雷射扫描显微图 ,细胞以CD4基因转感,并与重组体制造 之HIV-1粒子共培育,再与HIV特异抗 体共培育。步骤详细内容述于下文15.1 部 份。 |
