一种虎杖生物活性成分的提取方法

摘要

本发明公开了一种虎杖生物活性成分的提取方法，该方法包括如下步骤：称取虎杖，粉碎，过18‑22目筛，投入到回流罐中；加入虎杖重量6‑10倍的75‑85％的酒精，在55‑65℃温度下回流2.5‑3.5小时；在回流液体中加入饱和硫酸铵至产生沉淀，过滤除去沉淀；回收酒精，得到醇提液；浓缩得到浓缩浸膏；水沉取上清液；再浓缩得到浓缩浸膏；再醇溶取上清液；将上清液用磺化聚醚砜(SPES)平板超滤，收集沉淀和上清液；分离纯化大黄素，其纯度为99.8％；对上清液用大孔树脂吸附；分离纯化虎杖甙，其纯为99.5％以上；分离纯化白藜芦醇，其纯度为99.2以上％。本发明方法所采用设备简单，工艺简单可行，便于工业化生产，所用溶剂无毒无残留，不产生环境污染。

主权项

一种虎杖生物活性成分的提取方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤一：准备：称取虎杖，粉碎，过18‑22目筛，投入到回流罐中；步骤二：回流：加入虎杖重量6‑10倍的75‑85％的酒精，用1％的KOH溶液调节pH值为8.5‑9.5，在55‑65℃温度下回流2.5‑3.5小时；步骤三：二次回流：加入虎杖重量5‑7倍的75‑85％的酒精，用1％的KOH溶液调节pH值为8.5‑9.5，在55‑65℃温度下回流1.5‑2.5小时；步骤四：过滤：合并两次回流液体，用HCl中和至pH值为6.5‑7.0，加入饱和硫酸铵至产生沉淀，过滤除去沉淀；步骤五：回收酒精：从滤液中回收酒精至酒精含量为15％以下，得到醇提液；步骤六：浓缩：将酒精含量为15％以下的醇提液浓缩至比重为1.0‑1.5，得到浓缩浸膏；步骤七：水沉：将浓缩浸膏用4‑6倍重量的80‑90℃的热水充分搅拌溶解，保温0.5‑1.5小时后迅速高速离心过滤，除去水不溶性成分取上清液；步骤八：再浓缩：将步骤七得到的上清液浓缩至比重为1.0‑1.5，得到浓缩浸膏；步骤九：再醇溶：将步骤八得到的浓缩浸膏用4‑6倍重量的75‑85％的酒精溶解过夜，高速离心分离醇不溶沉淀，取上清液；步骤十：超滤：将从骤九得到的上清液中回收酒精至酒精含量小于15％，将上清液用磺化聚醚砜平板超滤，收集超滤液，用水稀释超滤液至酒精浓度为50％，看到絮状物，冷冻过夜，收集沉淀和上清液；步骤十一：分离纯化大黄素：将步骤十得到的沉淀加到5％碳酸钠溶液中，再加入乙醚均匀混合，静置后分为乙醚层和碱液层，取碱液层酸化沉淀，将酸化沉淀物用丙酮重结晶，得到橙色针状结晶大黄素，其纯度为99.8％；步骤十二：分离上清液：对步骤十得到的上清液用大孔树脂吸附，分别洗脱收集40％酒精溶液的洗脱液和80％酒精溶液的洗脱液；步骤十三：分离纯化虎杖甙：将步骤十二得到的40％酒精洗脱液蒸发至无酒精味，用5倍纯水稀释，用5％的Na₂CO₃水溶液调节pH值至8.5‑9.5，充分搅拌至完全溶解，然后高速离心过滤得上清液，将该上清液用盐酸酸化至pH 4.5‑5.5，过夜冷藏，然后离心分离收集沉淀，对得到的沉淀用冷纯水洗涤4‑6次，再用乙醚充分洗涤1‑3次，然后将沉淀用该沉淀10倍重量80％的酒精一起加热溶解，冷却后高速离心沉淀得到上清液，将上清液稀释至酒精含量15％以下，酸化高速离心收集沉淀，对沉淀水洗4‑6次，乙醚洗涤1‑3次，真空干燥，得到无色针状结晶的虎杖甙，其纯为99.5％以上；步骤十四：分离纯化白藜芦醇：将步骤十二得到的80％酒精洗脱液蒸发至酒精含量15％以下，5倍重量纯水稀释，用1％的KOH水溶液调节pH至10.5‑11.5，完全溶解，然后离心过滤得上清液，将该上清液用盐酸酸化至pH5.0‑6.0，冷藏过夜，收集沉淀，对沉淀用纯水洗涤4‑6次，乙醚洗涤1‑3次，再用1％的KOH水溶液调节pH至10.5‑11.5，搅拌至完全溶解，再用盐酸酸化至pH 5.0‑6.0，冷藏过夜沉淀，将所得沉淀用纯水洗涤2次，乙醚洗涤2次，真空干燥，得到白色针状结晶的白藜芦醇，其纯度为99.2％。