发明名称 |
一种防治松墨天牛的胞外全蛋白提取液的制备方法 |
摘要 |
一种防治松墨天牛的胞外全蛋白提取液的制备方法,属于林业害虫生物防治技术领域。其特征在于具体包括以下步骤:1)将球孢白僵菌菌株接种培养得发酵液;2)发酵液分离,收集上清液,除去菌丝,滤液为胞外全蛋白粗提液;3)胞外全蛋白粗提液,加入乙二胺四乙酸,并在冰浴条件下加入硫酸铵粉末,搅拌溶解后静置过夜,沉淀用磷酸缓冲液溶解,即得胞外全蛋白粗提浓缩液;4)胞外全蛋白粗提透析,浓缩液分离,上清液过滤除菌,即为胞外全蛋白提取液。上述一种防治松墨天牛的胞外全蛋白提取液的制备方法,制得的胞外全蛋白提取液具有强烈的杀虫活性,能防治松墨天牛,使用安全高效,无污染,防治效果较好,是良好的生物防治药剂。 |
申请公布号 |
CN102731612B |
申请公布日期 |
2016.12.21 |
申请号 |
CN201210220615.6 |
申请日期 |
2012.06.29 |
申请人 |
浙江农林大学 |
发明人 |
林海萍;毛胜凤;刘洪波 |
分类号 |
C07K1/30(2006.01)I;A01N63/04(2006.01)I;A01P7/04(2006.01)I;A01P17/00(2006.01)I |
主分类号 |
C07K1/30(2006.01)I |
代理机构 |
杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 |
代理人 |
吴秉中 |
主权项 |
一种防治松墨天牛的胞外全蛋白提取液的制备方法,其特征在于具体包括以下步骤:1)将球孢白僵菌菌株接种在PPDA培养基上,于23‑24℃培养箱中培养15‑16d后,刮下分生孢子,用无菌水稀释成1×10<sup>8</sup>个·mL<sup>‑ 1</sup>的孢子悬浮液,按孢子悬浮液:发酵培养基体积比为0.5‑1.5:100的比例接种于发酵培养基上,再将其置于23‑24℃、140‑150rpm的恒温振荡培养箱里培养6‑7d,备用;2)取步骤1)发酵液,3‑5℃、3500‑4500rpm离心10‑15min,收集上清液,用3层滤纸真空抽滤,除去发酵液中悬浮的菌丝,收集的滤液得胞外全蛋白粗提液,备用;3)取步骤2)胞外全蛋白粗提液,每100mL中加入10pL乙二胺四乙酸,并在冰浴条件下加入硫酸铵粉末至其饱和度达85‑95%;同时用磁力搅拌器不断搅拌以加速硫酸铵的溶解,控制加入速度使不起泡沫;最后,3‑5℃下静置过夜,而后将该粗提液3‑5℃、9500‑10000rpm离心10‑15min, 弃上清液,将沉淀用其重量4‑5%的0.04mol·L<sup>‑ 1</sup>,pH =6.6的磷酸缓冲液溶解,即得胞外全蛋白粗提浓缩液,备用;4)取步骤3)胞外全蛋白粗提浓缩液装入透析袋中,4.5‑5℃下透析17‑18h,透析液为稀释3.5‑4.5倍的0.04mol·L<sup>‑ 1</sup>,pH =6.6的磷酸缓冲液,透析后的浓缩液,经3‑5℃、5000‑6000rpm离心10‑15min,弃沉淀,收集上清液,并经0.21‑0.26μm细菌过滤器过滤除菌,最终所得滤液即为胞外全蛋白提取液。 |
地址 |
311300 浙江省杭州市临安市环城北路88号 |