定量检测荷花腐败病菌的实时荧光等温扩增引物组、反应体系及检测方法

摘要

本发明根据荷花腐败病菌线粒体小亚基(mtSSU rRNA genes)基因序列设计得到一组实时荧光等温扩增(Real‑time LAMP)引物组，包含一对外引物F3、B3和一对内引物FIP、BIP，并建立荷花腐败病菌的实时荧光等温扩增(Real‑time Fluorescence Loop‑mediated Isothermal Amplification)检测体系。实时荧光等温扩增反应体系中含有该组实时荧光等温扩增引物组、荧光染料、反应液及Bst DNA聚合酶，加入待检样品DNA，随着等温扩增反应的进行，实时检测反应体系的荧光强度，并根据实时荧光分析仪上的分析软件计算Ct值，从而计算出待检DNA提取液中荷花腐败病菌的DNA含量。该方法操作简便、快速；特异性好，灵敏度高；可对荷花腐败病菌进行快速定量检测，能真实反映荷花腐败病菌侵染植株的情况；适于在植物病害诊断检测领域广泛推广应用。

主权项

一种用于定量检测荷花腐败病菌的实时荧光等温扩增引物组，其特征在于，所述实时荧光等温扩增引物组包含一对外引物F3、B3和一对内引物FIP、BIP，所述外引物F3、B3和所述内引物FIP、BIP的序列分别为：F3：CCAGACGGTCAATATAGCTTAT；B3：TAGTTTGCTAGGCTAACCCTA；FIP：CATAGAGGGCTGCCTTCGCGGCAGTACTTGAGGAGGA；BIP：GGACGAAGGCACAGAGAACAAGTTATCTGACCTATGGCATTCA。