一种提高维生素K₂胞外分泌能力的方法

摘要

本发明公开了一种提高维生素K₂胞外分泌能力的方法，该方法通过分子生物学手段调节黄杆菌细胞膜脂肪酸的饱和度，提高了黄杆菌细胞膜通透性，解除了维生素K₂胞内合成过程中中间代谢物和关键酶对其产生的反馈抑制，从而促进了维生素K₂胞外分泌的能力，提高了维生素K₂的总产量。本发明为维生素K₂工业化生产提供了一条菌种改造的新思路，在食品、生物制药领域具有较大的实际应用价值和广阔的应用前景。

主权项

一种提高维生素K₂胞外分泌能力的方法，其特征在于,所述方法包括如下步骤：a、提取向日葵全基因组；b、以硫酯酶基因为目的基因设计引物对，对向日葵全基因组进行PCR扩增目的基因片段；c、将目的基因片段与载体连接构建用于表达硫酯酶活性的表达载体；d、表达载体转化黄杆菌，并利用表达载体上的抗性基因筛选转化子，将筛选到的转化子转接到斜面培养基；e、从斜面培养基上挑取菌落在种子培养基上进行培养基因改造菌；f、将基因改造菌接入发酵培养基中发酵培养后，经离心分离获得含有维生素K₂的菌体和发酵上清液。