一种对任意核酸实施靶向切割的方法

摘要

本发明涉及一种对任意核酸实施靶向切割的方法，为了建立该方法，构建并表达了一类结构识别核酸内切酶。具体步骤包括选择靶核酸的切割位置，设计与之互补的核酸探针；加入反应体系，使探针与底物杂交，形成可被结构识别核酸内切酶识别的二级结构；加入该类酶进行切割反应。其中，可被识别的核酸结构包括核酸侵入结构等；该类核酸内切酶的识别功能域由一类能够识别上述核酸二级结构酶的肽段组成，可选自E.coliMuts等；切割功能域选自IIS型核酸内切酶的切割功能；该类核酸内切酶的识别功能域和切割功能域之间的连接片段主要由丝氨酸和甘氨酸组成；该方法突破核酸底物序列的限制，因此可以实现对不同序列核酸的有效靶向切割。

主权项

一种对任意核酸实施靶向切割的方法，其特征在于根据目标核酸的靶位点，设计针对靶位点的核酸探针；加入核酸探针，使其与目标核酸杂交，形成能够被一类识别核酸结构并具有切割活性的酶识别的结构；在所述的识别核酸结构并具有切割活性的酶存在的情况下，核酸探针与目标核酸形成的杂交结构被酶切割；对于序列不同的靶核酸，只需要更换对应的核酸探针，无需更换酶，即能够对任意序列核酸进行靶向切割;所述的识别核酸结构并具有切割活性的酶为一种重组结构识别核酸内切酶，包含识别功能域、切割功能域以及连接二者的肽段；所述的识别功能域为能够识别结构为5’突出核酸结构、3’突出核酸结构、切刻核酸结构、侵入核酸结构、三链核酸结构、Y型核酸结构以及由错配或缺失核酸引起的鼓泡核酸结构中的至少一种的识别功能域；所述的切割功能域为IIS型核酸内切酶的切割功能域；所述的连接肽段为不影响结构识别与酶切功能的的柔性肽段。